Diferencia Principios De Separación: Adsorción, Intercambio iónico, Exclusión Y Afinidad.

Diferencia entre principios de separación: adsorción, intercambio iónico, exclusión y afinidad.

Separación por adsorción:

En esta, la separación depende de los equilibrios de adsorción-desorción de los componentes de la mezcla, entre la fase estacionaria sólida y la fase móvil líquida o gaseosa. La fuerza con que es adsorbido un componente depende de la polaridad de este, de la actividad del adsorbente y de la polaridad de la fase móvil. En general, cuanto más polar es un compuesto, más fácilmente será adsorbido. La cromatografía de adsorción es una técnica que está particularmente bien adaptada para la separación de compuestos de baja y media polaridad. La separación de compuestos muy polares mediante cromatografía de adsorción requiere, debido a la gran retención que ofrecen, la utilización de adsorbentes muy poco activos, o bien, tratamientos químicos previos para la preparación de la muestra a fin de reducir su polaridad.

Separación por intercambio iónico:

Las separaciones por intercambio iónico se llevan a cabo con materiales insolubles y de textura porosa, los cuales presentan grupos reactivos asociados a iones lábiles capaces de intercambiarse con los del medio que les rodea, por lo que, inevitablemente este tipo de cromatografía ha de realizarse en medio líquido. La cromatografía de intercambio iónico es utilizable para la separación de sustancias iónicas, tanto orgánicas como inorgánicas. Las separaciones por intercambio iónico están basadas en los diferentes equilibrios de reparto de los iones de la mezcla entre el material cambiador y la disolución. En general, se utilizan tres tipos de materiales para la cromatografía de intercambio iónico: resinas, geles y celulosas. La diferencia principal entre ellos reside en su microestructura, ya que generalmente, las resinas presentan un tamaño de poro mucho menor, siendo apropiadas para la separación de sustancias de pequeño volumen molar. Otras diferencias existentes entre los diferentes materiales para el intercambio iónico son debidas a la naturaleza de los grupos cambiadores (fuerza del grupo cambiador) y al número de éstos por unidad de peso de material (capacidad de cambio).

Separación por exclusión:

Consiste en la separación de las moléculas basándose en su tamaño en lugar de su solubildad o polaridad. Las fases estacionarias utilizadas para este tipo de cromatografía son inorgánicas (zeolitas), o geles orgánicos compatibles con disolventes acuosos (agarosa, poliacrilamida) u orgánicos (copolímeros estireno/divinilbenceno). Estas fases estacionarias poseen cavidades en las cuales las moléculas de los compuestos a separar pueden penetrar y ser retenidas, siendo las moléculas mayores las eluidas de la columna en primer lugar; el rango de trabajo de estas fases estacionarias se define como el intervalo de pesos moleculares que pueden ser separados; otro parámetro que caracteriza a este tipo de fases es su límite de exclusión, que se define como el peso molecular a partir del cual los compuestos pasarán a través del lecho estacionario sin experimentar retención.

Separación por afinidad:

La Cromatografía de Afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando. En este caso, las proteínas que se retienen en la columna son aquellas que se unen específicamente a un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la columna. Después de que las proteínas que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a través de la columna, la proteína de interés que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una solución que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interacción entre el ligando y la proteína.

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