Electroporacion

En la técnica de transferencia de genes por electroporación, la introducción del DNA a los protoplastos se logra mediante la aplicación de un campo eléctrico intenso por un tiempo muy breve (del orden milisegundos), que provoca la permeabilización reversible de la membrana celular a moléculas polares. Los primeros reportes de trasformación de protoplastos por electroporación despertaron gran interés, parcialmente porque entre las especies vegetales ensayadas se incluyeron algunas gramíneas. Enfatizó la mayor eficiencia o trasformación logra respecto a otros métodos de transferencia directa de genes utilizados en ese tiempo. La técnica se ha perfeccionado atreves del estudio de los parámetros determinantes de la eficiencia global del sistema, tales como intensidad del campo eléctrico, duración del pulso aplicado, concentración DNA y de cationes divalentes. La duración del pulso eléctrico es en apariencia, un factor crítico en esta técnica. Los pulsos en el rango de milisegundos dan lugar a eficiencias de trasformación mayores, pero hay una drástica disminución en la viabilidad de las células con forme se incrementan. Por otra parte, la electroporación en el orden de microsegundos produce resultados aceptables y se combina con la adición de PDEG, y no se afecta notoriamente la viabilidad de los protoplastos. El método de electroporación ha permitido la transformación estable de células de especies de importancia agrícola, entre las que destacan los cereales maíz y arroz.

Consideradas en conjunto, las técnicas de trasferencia directa de genes han sido aplicadas con cierto éxito a la producción de plantas transgénicas, y estudios de expresión transitoria, de los que se consideraban el método de elección antes del advenimiento del método biolistico, por el elevado porcentaje de células que expresan temporalmente los genes que se transfectan: sin embargo, los protoplastos no constituyen un sistema apropiado para el análisis de secuencias reguladoras implicadas en el control trascripcional especifico de tejidos. Por otra parte parece improbable, que la aplicación de estas metodologías llegue a generalizarse, ya que existen serios problemas con la regeneración plantas a partir de protoplastos para muchas especies vegetales. La reciente descripción de un método de electroporación que permite trasformar tejido organizado, y promedio del cual se elaboró la expresión transitoria de los genes leumicina/fosfotrasfera y beta /glucuronidasa trasfectadas a tejidos de trigo, arroz, maíz y cebada, permite prever avances que conduzcan a una aplicación más extensa de estas técnicas modificadas, tanto para estudios de expresión transitoria como para la obtención plantas transgénicas.

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