TECNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE

TECNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE

INTRODUCCIÓN

El  método  de  numero  más  probable  (NMP)  es  una  estrategia  eficiente  de estimación  de  densidades  poblacionales  especialmente  cuando  una  evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia (pos o neg) en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes; en este caso de alimentos. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la población(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilística.

Algunas de las ventajas del NMP son: (i) la capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una  muestra  de  suelo  usando  el  método  de  infección  de  plantas,  (ii)  provee  una recuperación  uniforme  de  las  poblaciones  microbianas  de  suelos  diversificados,  (iii) determina sólo organismos vivos y activos metabólicamente, y (iv) suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.

OBJETIVOS

• Realizar siembras en superficie 0.1ml de las diferentes diluciones en el agar correspondiente.

• Contar las UFC teniendo en cuenta las reglas, después de evaluar la calidad de los controles y de las diluciones.

• Realizar diluciones logarítmicas en base 10 a partir de los homogenizados.

MATERIALES

• Medios de cultivos :

• Bilis verde de brillante lactosa con Durham
• A. EMB
• Agua peptona 0.1%

• Materiales:

• Homogeneizador
• Incubadora
• Pipetas 1 y 10 ml
• Gradilla
• Tubos de ensayo

METODOLOGÍA

• Muestras: se tomaron 10 ml de jugo de mora natural
• Extracción de microorganismos viables: para la muestra de jugo los microorganismos pueden ser removidos y homogenizados, adicionando 10ml de muestra a un frasco que contenga 90 ml de agua peptona; dilución (). Se agito moderadamente por un tiempo significativo.[pic 1]
• Diluciones en serie: se utilizo la técnica con 9 tubos para muestras diluidas liquidas o solidas. la muestra de jugo se diluyo seriada mente; transfiriendo 1ml de la dilución () a un tubo que contenía 9 ml de agua peptona; dilución  ). Luego se tomaron 1ml de la dilución ( ) y se adicionaron en un tubo de ensayo que contenía 9 ml de agua peptona; dilución ( ).[pic 2][pic 3][pic 4][pic 5]
• Tubos de ensayo: se marcaron 9 tubos de ensayo que contenían el medio Bilis verde brillante lactosa; tres con dilución (), tres con dilución ( ), y tres con dilución  ( ).[pic 6][pic 7][pic 8]
• Inoculación: se transfirió 1 ml de muestra de cada dilución en los tubos correspondientes.
• Incubación: se incubaron por 24- 48 horas a una temperatura de 37 grados centígrados.
• Evaluación de crecimiento: para cada dilución se evaluó la presencia o no. Los resultados se expresaron como lo indica la tabla n° 3.

RESULTADOS Y ANÁLISIS

• Los resultados obtenidos se expresaron, según lo conforme a la tabla n° 3; la cual corresponde cuando se utilizan 9 tubos para muestras diluidas.  Solo se identifico cambio de color en las diluciones ), donde se observo un color azul verdoso; indicando la presencia de coliformes totales. La identificación se logro, gracias a que  las coliformes totales están dentro del grupo de las bacterias gran negativas, aerobias o anaerobias que son capaces de fermentar la lactosa.[pic 9]
• En la prueba de fluorescencia; se observo  en los tubos positivos un color fluorescente; lo que indico la presencia de coliformes fecales. El origen de estos microorganismos, puede ser por el agua con que se realizo el jugo o por el ambiente.
• La cantidad de tubos positivos son 300, lo que corresponde a una densidad de 23 NMP/ ml. Densidad que está dentro del rango permitido.

ANEXOS

-I Imágenes de los resultados obtenidos en la práctica

[pic 10] [pic 11]

[pic 12][pic 13]

[pic 14]

[pic 15]

CONCLUSIÓN

El procedimiento de fermentación en tubos múltiples es el método más usado por su facilidad y economía. El resultado de esta prueba se expresa por “el número más probable” (NMP), pero debe entenderse que este método no es exacto ya que sólo nos da la probable densidad de bacterias coliformes totales o fecales de una muestra determinada. La confiabilidad está dada por los niveles superiores o inferiores del límite de confianza al 95% establecidos en las tablas para cada NMP/100 mL, no obstante, es una indicación importante para evaluar la calidad sanitaria de los alimentos, en este caso el jugo de  mora que se trabajó en la práctica.

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