La morfología bacteriana

La mayoría de los organismos necesitan ser previamente teñidos para poder distinguirlos del medio (tinciones simples). Para contrastar o realzar de forma específica distintas características morfológicas o estructurales se emplean tinciones diferenciales. Estas técnicas tienen un gran interés en la identificación y clasificación de las bacterias.

La tinción diferencial más utilizada es la tinción de Gram. Otras tinciones de gran importancia son las que diferencian bacterias “ácido- alcohol resistentes”, las que diferencian estructuras significativas como las esporas o la tinción negativa de cápsulas.

OBJETIVO

GENERAL

• Reconocer la morfología bacteriana utilizando las técnicas adecuadas de tinción de gran.

ESPECIFICO

• Conocer los medios de cultivos

• Identificar medios de cultivo - método de siembra.

METODOLOGÍA

Materiales, equipos y/ o reactivos

- Microscopios

- Papel arroz

- Porta Objetos

- Alcohol

- Aceite de Inmersión

- Coloración de Gram ( Cristal Violeta , Solucion de Lugol , alcohol –acetona , safrina o fucsina)

PROCEDIMIENTO

Preparación del frotis

- Calentar el asa de inoculación hasta que este al rojo.

- Tomar la porción de la muestra que se va a examinar por medio de una asa o escobillon.

- Colocas la muestra sobre un portaobjetos limpio y sin grasa, debidamente marcado.

- Trazar con la muestra una espiral del centro a la periferia ( si la muestra no es liquida , colocar una péquela gota de solución salina sobre el portaobjetos antes de realizar el frotis y disolver en ella la muestra).

- Calentar nuevamente el asa para desinfectarla.

- Dejar secar el frotis al medio ambiente.

- Fijarlo pasándolo tres veces a través de la llama con la muestra hacia arriba.

- Dejar enfriar el frotis antes de colorearlo.

Preparación en fresco

- Desinfecte el asa redonda en el mechero y enfríela.

- Si el cultivo es líquido coloque con el asa una pequeña gota sobre una lámina portaobjetos.

- Si el cultivo es sólido coloque en la lámina portaobjetos una pequeña gota de solución salina.

- Tome con el asa una pequeña porción de la colonia y disuélvala en la solución salina.

- Desinfecte nuevamente el asa.

- En cualquiera de los dos casos cubra la preparación con una laminilla cubreobjetos.

- Enfóquela en el microscopio con objetivo de 40x.

- Observe y describa lo observado.

Coloración

- Verter el cristal violeta sobre el portaobjetos y dejar actuar por 1 minuto.

- Enjuagar con agua corriente y dejar escurrir.

- Agregar la solución de lugol y dejar actuar por 1 minuto.

- Escurrir la solución y enjuagar el portaobjetos con agua corriente.

- Decolorar con alcohol-acetona por 5 segundos y enjuagar con agua.

- Agregar la solución de safranina y dejar actuar por 30 segundos, escurrir y dejar secar al aire.

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