Aprender los diferentes tipos de siembra de microorganismos, así como la observación de crecimiento en diferentes medios de cultivo

Aeromonas

PseudAeromonas

PseudomonPRATICA No.5

TÉCNICAS DE SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO Y OBSERVACION DE CARACTERISTICAS DE CRECIMIENTO.

Competencia

Aprender los diferentes tipos de siembra de microorganismos, así como la observación de crecimiento en diferentes medios de cultivo.

Introducción

La inoculación de medios para cultivo e identificación de microorganismos es un procedimiento a la vez fundamental e importante en toda investigación microbiológica, es por eso que se debe tener cuidado con esta técnica con el objeto de evitar la contaminación de los cultivos; las medidas de precaución que se aplican para prevenir la contaminación comprenden el procedimiento denominado técnica aséptica. Es de suma importancia tomar en cuenta que los ingredientes y los utensilios de vidrio que se usan en la preparación de los medios pueden contener microorganismos indeseables, por tal motivo los medios recién preparados se deben esterilizar inmediatamente, los tubos que contienen medio se tapan con tapón de algodón o tapas metálicas o plásticas con el fin de evitar la penetración de microorganismos extraños. Otras precauciones que se deben tener en los procedimientos de aislamiento y cultivo de microorganismos es flamear el borde de los tubos y el calentamiento al rojo el asa o agujas de inoculación.

Cuando se trabaja con cultivos microbianos, la técnica aséptica se utiliza para prevenir la introducción de organismos adicionales al cultivo. Se han desarrollado y aplicado diversos procesos de desinfección y esterilización para limitar o eliminar la presencia de microorganismos. La esterilización es un método de

eliminación total de cualquier forma viviente, mientras que la desinfección es un proceso que elimina únicamente formas vegetativas de los microorganismos.

Esta práctica está destinada a que el estudiante se familiarice con las técnicas fundamentales de siembra empleadas para aislar y desarrollar cultivos microbianos; además de observar las diferentes características de crecimiento como son: turbidez, formación de sedimento, crecimiento en la superficie en el caso de medios líquidos. En medios sólidos se observa la formación de colonias en su extensión, color, opacidad, consistencia y modificación que sufre el medio por el metabolismo bacteriano.

Metodología

Material:

3 cajas petri con agar nutritivo

3 tubos con caldo nutritivo estéril

3 tubos con agar nutritivo inclinado estéril

Gradilla

Asa de siembra

Pizeta con alcohol

Equipo:

Incubadora

Reactivos:

Agua destilada

Alcohol

Procedimiento

A. Siembra en cajas petri

1. Una caja petri se dejara como control e identificarla.

2. En una caja petri se realizara la técnica por agotamiento e identificarla.

3. La muestra se extiende sobre la superficie de forma que al final de dicha siembra la cantidad de inoculo sea lo suficientemente bajo, para que se depositen células aisladas y distanciadas en la superficie del agar a partir de las cuales surjan tras incubar.

4. En otra caja petri sembrar por estría cruzada

Aeromonas

Pseudomonas

B. Transferencia tubo a tubo.

1. Cada equipo sembrará 3 tubos practicando los diferentes tipos de transferencia (Fig. 1):

• Caldo

• Agar inclinado

Figura 1. Procedimiento de transferencia de inóculo de tubo a tubo.

Rotular el tubo con el nombre de la cepa, la fecha y el nombre del alumno.

Sostener los tubos con la mano no dominante. Si los tubos tienen un tapón en rosca, aflójalo de manera que solo se necesite levantarlo para quitarlo. Si tiene un tapón de algodón, sácalo un poco de manera que no esté muy apretado.

Flamear el asa en el mechero Bunsen. El asa se sostiene con la mano dominante, como sosteniendo un lápiz o una pluma. Dejar que el alambre se ponga al rojo vivo. Dejar enfriar el asa unos breves segundos.

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