Apuntes bioquimica. Choque osmótico

Choque osmótico:

El medio hipotónico es el que da lugar al rotura de las estructuras. Se usa en células sin pared celular.

Congelación-descongelación:

Debemos realizar ciclos sucesivos para evitar la formación de cristales que pueden causar daños mecánicos y osmóticos. La congelación se lleva a cabo con nitrógeno líquido o nieve carbónica, CO2 en estado sólido, (hielo seco). Es útil para tejidos blancos. No confuncir con crioproteccion.[pic 1]

Detergentes:

Son moléculas anfipáticas capaces de formar micelas en agua

Tipos:

• Iónicos: cabeza con carga: acción desnaturalizante
• No iónicos: cabeza sin carga: no acción desnaturalizante

Lisis alcalina:

Se usa para obtener ADN plasmídico en bacterias. Para ello provocamos la desnaturalización del ADN con SDS y NaOH. Si nos interesa la renaturalización usamos acetato potásico.

Solventes orgánicos:

Tienen bajo peso molecular, son volátiles y líquidos a temperatura ambiente. Solubilizan las membranas celulares y son desnaturalizantes

Enzimas:

Nos ayudan a degradas paredes celulares. Según el tipo de pared usamos distintas enzimas:

• Bacterias:

• Gram +: lisozima
• Gram -: 1º EDTA 2ª lisozima

• Levaduras: Zymaliasa/liticasa

• Hongos: zymaliasa/liticasa + quitinasa

• Plantas: celulasa y pectinasa

Agitación con agresivos:

Son balas de vidrio, arena, tierra de diatomea…Debemos controlar la velocidad, concentración, concentración de las bolas de vidrio, diámetro de las bolas, temperatura, etc. Es muy útil en levaduras y tejidos deshidratantes. Funcionan debido a los cambios bruscos de presión que ocasionan rotura.

Si queremos usar arena o tierra la muestra debe estar congelada porque lo usaramos con un mortero de cerámica.

Sonicación (ultrasonidos)

Ejerce altas presiones transitorias por vibración ultrasónica. Es muy útil en bacterias y levaduras. Desventajas: grandes cantidades de calor y espuma en la superficie

Cavitación: creación de microburbujas que aumentan su tamaño hasta explotar y crear alta presión.

Prensas:

Hay de dos tipos: de Frenh y de Eaton. Someten a la muestra a altas presiones para que pase por unos pequeños orificios, lo que ocasiona un cambio brusco de presión y cizamientos.

Homogenizador de aspa:

Costa de hojas propulsadas a gran velocidad.

Polytron: sustancias blandas

Embolo de Potter:

Mano de almirez propulsada mecánicamente, lo que ocasiona un movimiento vertical y un giro sobre si mismo. Se usa en tejidos blandos.

Concentración:

Finalidad: disminuir el volumen de la muestra:

• Por precipitación:  (problema: añadimos algo a la muestra)

-Provocar que las moléculas precipiten para después resuspednder en volumen menor que el volumen inicial.

-No varia la estructura de las proteínas

-Capa o atmosfera de solvatación: moléculas de agua en la superficie de las proteínas

• Precipitacion salina: sulfato amonico

Altas concentraciones de sales para lograr la precipitación de las proteínas. La sal retra el agua de la superficie de las proteínas logrando que se formen agregados. Se conoce como “Saling-out” y es distinta para cada proteína y también sirve para purificar.

• Por TCA (acido tricloroacético)

Origina cambios de pH, provoca perdidas de la estructura secundaria. Favorece la agregación de proteínas desnaturalizadas y permite la renaturalización.

• Por filtración: (problema: interacciones entre las proteínas que quedan en  la membrana)

-Usa membranas porosas

-Separa en función del tamaño

-Se puede hacer por centrifugación o por bombas de vacío

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