Citocromo oxidasa

Citocromo oxidasa

Procedimiento

Se prepararon y rotularon 4 tubos de ensayo, limpios y secos . al tubo 1 se le adicionaron 0,5 mL de enzima, 1 mL de KCN 0,01 % Y 1 mL de p-fenilendiamina. Al tubo 2 se le adicionaron 0,5 mL de enzima, 1 mL de malonato 0,1 % y 1 mL de p-fenilendiamina. Al tubo 3 se le adicionaron 0,5 mL de enzima, 1 mL de agua destilada y 1 mL de p-fenilendiamina. Al tubo 4 se le adicionaron 1,5 mL de agua destilada y 1 mL de p-fenilendiamina. Se dejaron incubar a baño de agua de 37°C.

Tabla. Observaciones en ensayo de la citocromo oxidasa.

[pic 1]

Figura. Coloraciones observadas en ensayo citocromo oxidasa.

Discusión

En el ensayo de la enzima citocromo oxidasa presente en un extracto de corazón de rata se observaron las siguientes coloraciones. En el tubo 1 solución color pardo muy claro, tubo 2 y 3 soluciones de color pardo oscuro y en el tubo 4 solución de color amarillo claro. En el tubo 1 se observa esta coloración debido a la presencia del cianuro el cual es in inhibidor muy eficiente de la enzima citocromo oxidasa, por lo cual se observa una leve oxidación de la p-fenilendiamina. En los tubos 2 y 3 se observa una coloración parda intensa debido a que la p-fenilendiammia es oxidada totalmente, a pesar de que el tubo 2 presenta un inhibidor competitivo (malonato) lo que demuestra que este no inhibe la enzima citocromo oxidasa. El tubo 4 no presenta coloración importante ya que en él no está presente la enzima estudiada. Por lo tanto la actividad enzimática es mayor en los tubos 2 y 3, a pesar de la presencia del inhibidor competitivo.

Conclusión

...