Reacción de la peroxidasa y de la polifenol oxidasa

UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA SALUD CAMPUS CAJEME[pic 1]

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II

PRÁCTICA 3

REACCIÓN DE LA PEROXIDASA Y DE LA POLIFENOL OXIDASA

INTEGRANTES:

• Rivera Viveros Eva Lilian
• Serna Peña Karina Alejandra
• Lopez Estrada Ana Camila
• Daniels Perla María Jacquelin
• Jiménez Paredes Laura Alejandra

Cd. Obregón, Sonora, México.                                                      12 de sep de 2023

OBJETIVO

Determinar la actividad enzimática de la peroxidasa y la polifenol oxidasa, obtenidas a partir de un extracto libre de células (extracto crudo) de la papa. 

RESUMEN

Se obtuvo una variedad de resultados físicamente visibles con respecto a cada reactivo añadido y la actividad enzimática llevada a cabo como consecuencia al estar en contacto con la solución de almidón extraído de la papa. Tanto la peroxidasa como el polifenol oxidasa catalizan la oxidación en alimentos, poseen propiedades antioxidantes.

Los tubos con catecol (1 y 3) tomaron sus respectivas tonalidades en café y, en caso del tubo 3, se observó un degradado rojo a incoloro. Los tubos con catecol y peróxido se tornaron negros. Los tubos con pirogalol (incluyendo los que variaba agregando diferentes reactivos) presentaron colores cafés. Los tubos con tirosina se tornaron rosados.

INTRODUCCIÓN

Los métodos enzimáticos se utilizan para la determinación de diversos componentes de los alimentos, como azúcar, ácido o alcohol. Estos métodos son importantes a la hora de analizar, por ejemplo, vino, cerveza, zumos de fruta o productos lácteos.

Las peroxidasas son enzimas que catalizan la oxido-reducción de H2O2 y una gran variedad de donadores de hidrógeno. Se encuentran ampliamente distribuidas en plantas, animales y microorganismos las cuales están divididas en tres superfamilias basadas en su estructura y propiedades catalíticas. La polifenol oxidasa es una enzima tetramérica que contiene cuatro átomos de cobre por molécula, y posee sitios de unión para compuestos aromáticos y oxígeno.​

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales y reactivos:

En esta práctica haremos uso de peróxido de hidrógeno al 3%, catecol o pirocatecol al 1%, pirogalol al 1%, tirosina al 1%, cianuro de sodio al 5% como reactivos; y como material necesitamos una gradilla, 15 tubos de ensaye 13x100, 2 vasos de precipitados de 250mL, 1 mortero, 1 bandeja para hielo, 1 varilla agitador, 1 pipeta de 5mL. 3 pipetas de 1mL, 1 pinza para tubos de ensaye, y una parrilla para calentar.

Métodos:

En una cuba con hielo colocamos un vaso de precipitados de 250 mL, con 100 mL de agua destilada, al menos 10 min, al mismo tiempo también colocamos el mortero en el hielo, con ayuda del mortero molemos una papa previamente picada los más rápido posible para que no se oxide. Una vez molida la pulpa de la papa se deja reposar por 10min para que el almidón se asiente luego con ayuda de unas gasa filtramos el contenido en el vaso que se encuentra en el hielo, lo dejamos reposar por 5 min, colocamos otro vaso de precipitados de mL, desechamos el exceso almidón y obtenemos una solución de almidón. Una vez hecho lo anterior preparamos un baño maría con la parrilla eléctrica y una vaso de precipitados, los 13 tubos fueron numerados y etiquetados, a los tubos 1,2,3,4 y 11 se les añadió 0.5 mL de catecol, a los tubos 5,6,7,8 y 12 se le adiciona 0.5 mL de pirogalol, a los tubos 9 y 10 se les adiciona 2 mL de tirosina, a los tubos 2,4,6,8,10,11 y 12 se le agrega 0.5 mL de peróxido de hidrógeno, se le añaden 4 gotas de cianuro de sodio al los tubos 7 y 8; a dos de tubos de ensaye vacíos se les añade 5mL de solución de almidón, se calienta por 5 min, una vez enfriados se les añade el contenido del tubo 3 y 4, a los tubos 11 y 12 se les añade 5mL de agua destilada, se adiciona 5 mL de solución de almidón a los tubos 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 10 y 13, una vez mezclado se deja reposar y se observan cambios durante los siguientes 15 min

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