Citocromo Oxidasa

. INTRODUCCION

La importancia de la composición química de la leche depende de su importancia nutricional, ya que es el único alimento de los mamíferos recién nacidos. Su composición es óptima como alimento del lactante y solo presenta deficiencias en algunos minerales y en vitamina D.

La composición de la leche varía en las distintas especies y aun en la misma especie según los períodos de lactancia, la dieta ingerida y secreción hormonal.

II. MATERILES Y REACTIVOS.

Material por grupo

Diez tubos de ensayo

Un vaso de precipitados de 250ml

Dos vasos de precipitados de 150ml

Dos pipetas graduadas de 5ml

Un embudo de vidrio mediano

Un erlenmeyer de 150ml

Una gradilla

Una propipeta

Una pinza para tubo de ensayo

Un pedazo grande de gasa

Un papel de filtro

Una espátula

3 Goteros plásticos

Vidrio de reloj

2 Tubos de centrífuga

Material y reactivos generales.

- Acido clorhídrico 10% (100ml)

- Eter etílico(100ml)

- Acido nítrico concentrado (200ml)

- Etanol al 95% (200ml)

- Hidróxido de sodio 1% (300ml)

- Reactivo de Biuret (500ml)

- Reactivo de Millón (200ml)

- Solución de molibdato de amonio al 1% (200ml)

- Solución de ácido ascórbico al 0,1% (200ml)

- Solución de oxalato de amonio al 4%

- Reactivo de benedict (200ml)

Tiocianato de Potasio 3N

- Lámpara de luz ultravioleta

- Goteros plásticos

Muestras: leche de cabra cruda ( 500 ml) sesión 1: lunes 12 de marzo

Leche de vaca cruda (500ml) sesión 2: lunes 26 de marzo

III. PROCEDIMIENTO.

3.1 Identificación de proteínas

Pese el vidrio de reloj, el papel filtro y la gasa que usará.

Coloque en un vaso de precipitado 50ml de leche y 50ml de agua destilada, añada gota a gota y con agitación suave ácido clorhídrico al 10% hasta que observe que la leche se “corto”; (formación de un precipitado floculento). Controle con pH-metro el pH de la mezcla para que no sea menor de 4.0 ni mayor de 5.0, si hay un exceso de ácido, adicionar NaOH al 1% gota a gota y con agitación suave, hasta ajustar el pH. Dejar en reposo por unos minutos, filtre sobre gasa y luego sobre papel filtro, separe el precipitado del filtrado.

3.2 Sobre el precipitado de caseína agregar 7ml de etanol al 95% agitando suavemente con una varilla con el fin de remover la grasa presente, luego lavar con 7ml de éter etílico. Dejar unos 5 minutos al aire para que se evapore el éter residual que empapa el precipitado y la gasa. Colocar la gasa con la caseína en un vidrio de reloj y dejarlo secando en la estufa a 50ºC y pesar.

3.3 En un tubo de ensayo coloque 5ml del filtrado y caliente en un baño maría a ebullición; al formarse un precipitado deje en reposo hasta que se decante, centrifugue y elimine el sobrenadante. Divida el precipitado en dos tubos de ensayo y al primer tubo adicione 10 gotas del reactivo de millón y vuelva a calentar al baño maría, al segundo tubo adicione 10 gotas del reactivo de Biuret. Observe.

3.4 En dos tubos de ensayo coloque 3ml del filtrado y al primer tubo adicione 1.0ml

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