Cromatografia Liquida

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN

El HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatografía. En la HPLC socrática el compuesto pasa por la columna cromatografía a través de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeñas partículas redondeadas con ciertas características químicas en su superficie) mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. El grado de retención de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composición de la fase estacionaria y de la fase móvil. El tiempo que tarda un compuesto a ser diluido de la columna se denomina tiempo de retención y se considera una propiedad identificativa característica de un compuesto en una determinada fase móvil y estacionaria. La utilización de presión en este tipo de cromatografías incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro la columna y reduce así su difusión dentro de la columna mejorando la resolución de la cromatografía. Los disolventes más utilizados son el agua, el metanol y el acetonitrilo. El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el ácido trifluoroacético, que ayudan a la separación de los compuestos.

La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase estacionaria es sílica que se ha tratado con RMe2 SiCl .

La fase móvil actúa de portador de la muestra.

La muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los componentes de la solución emigran de acuerdo a las interacciones no-covalentes de los compuestos con la columna. Estas interacciones químicas, determinan la separación de los contenidos en la muestra.

La utilización de los diferentes detectores dependerá de la naturaleza de los compuestos a determinar.

1ÍNDICE

1.- Principio………………………………………………………………………………….

1.1 Tipos de HPLC…………………………………………………………………….

1.2 Cromatografía de fase normal…………………………………………………...

1.3 Cromatografía de fase reversa…………………………………………………..

1.4 Cromatografía de exclusión molecular………………………………………….

1.5 Cromatografía de intercambio iónico……………………………………………

1.6 Cromatografía basada en bioafinidad…………………………………………

1.7 Cromatografía líquida de alta eficacia en condiciones desnaturalizantes (DHPLC)………………………………………………………………………………..

2.- Parámetros………………………………………………………………………………

2.1 Diámetro interno…………………………………………………………………..

2.2 Medida de las partículas………………………………………………………….

2.3 Tamaño de poro…………………………………………………………………..

2.4 Presión del sistema……………………………………………………………….

3.- Fabricantes de aparatos de HPLC……………………………………………………

4.- Fabricantes de columnas de HPLC y accesorios……………………………………

1.0. CARACTERÍSTICAS Y EQUIPOS DISPONIBLES

1.0.1. Características más importantes…………………..

1.1. INSTRUMENTACIÓN PARA CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS

1.1.1. Recipientes para la fase móvil y sistemas para el tratamiento de los

Disolventes…………………

1.1.2. Sistemas de bombeo………………………..

1.1.2.1. Tipos de bombas…………………………..

1.1.2.2. Amortiguadores de pulsos……………………………

1.1.2.3. Control del caudal y sistemas de programación……………………

1.1.3. Sistemas de inyección de muestra……………………..

1.1.4. Columnas para cromatografía de líquidos……………………….

1.1.4.1. Columnas analíticas……………………………………..

1.1.4.2. Pre columnas…………………………..

1.1.4.3. Termostatos……………………………….

1.1.4.4. Tipos de rellenos de la columna…………………………

1.1.5. Detectores…………………………………………….

1.1.5.1. Detectores de absorbancia………………………

1.1.5.2. Detectores de fluorescencia……………………

1.1.5.3. Detectores de índice de refracción…………………………

1.1.5.4. Detector de dispersión de luz…………………………………

1.1.5.5. Detectores electroquímicos…………………………………………………..

1.2. TIPOS DE CROMATOGRAFÍA HPLC……………….

1.2.1. Cromatografía de reparto…………………………….

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