Cuadro de citoquimicas

mieloperoxidasa

Sudan segro

Esterasas

(PAS ) Acido peryodico de schiff

Gránulos PRIMARIOS de PMNs y Eos en sangre

– Gránulos PRIMARIOS de mieloblastos, promielocitos,

mielocitos y Metamielocitos enMO y SP

– Gránulos de Monocitos, dependiendo del nivel

activación

– NO en linfocitos o linfoblastos

Colorante

– 3,3´ diaminobenzidina u otros

• Actividad

– MPO en gránulos oxidan al colorante en presencia

de H2O2

– Reacción café marrón a negra en los gránulos

– + todas las celulas mielociticas y monocitos

• Control

– PMNs en FSP

Examine solo células

precursoras

– Blastos de MO y SP

POS de M1 a M4

– Recuerde que M0

puede ser negativa

– M5 puede ser

difusamente positiva

• Serie linfocitica es

NEGATIVA

SBB tiñe esteroides,

grasas neutras,

fosfolipidos.

– En granulos 1º y 2º de

celulas mieloides y

lisosomas de monocitos

– NO en linfocitos ni

Linfoblastos

INTERPRETACION

• Control positivo junto a

muestras de pacientes

– PMN s de Sangre

periférica POSITIVOS

• Paciente:

– Blastos de MO positivos

en LMA, no en LA

2 TIPOS:

• «Específica»: 2-4+ en precursores mieloides,

(NASDA)

– Substrato para Naftol AS-D cloroacetato esterasa

Negro-Azul en PMNs

• «No específica»: 1-3+ en precursores monocíticos,

– Substrato para Alfa-naftyl acetato esterasa ó naftil-butarato esterasa

Rojo en gránulos de

MONOs

PAS oxida el glucógeno y

otros carbohidratos a

aldehidos

• Los aldehidos producen

que el Reactivo de Schiff

cambie de incoloro a rojo

brillante.

– Estructuras finas y difusas

en Linfocitos

– Estructuras gruesas, tipo

bloque en eritroblastos

interpretacion:

• Control: PMNs y

Linfocitos de Sangre

periférica son POSITIVOS

– Son controles, sin

significancia clínica

• MO y FSP de pacientes:

– Los linfocitos en LLA

ambos patrones

combinados: difusos y en

bloque

– M6 es PAS-POSITIVO, los

eritroblastos tienen patron

en bloque

(LAP) Fosfatasa alcalina leucositaria

Los neutrófilos normales

tienen LAP unida a las

membranas celulares

• LAP hidroliza el

substrato: naftol AS-BI

fosfato que se tiñe con el

colorante es fast BB.

• Color producido es de

apariencia granulosa.

Diferencia una rxn Leucemoide de una LMC

Normal: 20-200

LMC, HPN, SMP (sind. mieloproliferativos)

• Reacción leucemoide: 20-200 ó más

• Policitemia Vera: > 200

• Policitemia secundaria: 20-200

Hidroliza en los linfocitos el acido

fosfórico- naftol AS-BI para liberar

el naftol.

– 5 isoenzimas

2. El ácido L-tartárico inhibe esta

reacción en todas, excepto la

isoenzima 5

– La leucemia de células peludas tiene

abundancia en isoenzima 5.

En la leucemia de células

peludas, los linfocitos

permanecen positivos en

el tratamiento con

tartrato.

COLLORACION INMUNOLOGICA:

Con

Anticuerpos policlonales o monoclonales dirigidos contra el marcador de superficie

CITOMETRIA DE FLUJO

Colorantes fluorescentes:

• Isothiocyanate—emite luz

a 520: VERDE

• Phycoerythrin (PE)- emite

luz a 578: ROJO

• Proteina Peridinin

clorophil (PERCP)-emite

luz a 670: AMARILLOROJIZO

Tienen Acs adheridos

Fuente Luz: LASER

• Un ángulo directo

(forward angle light scatter

FALS)

– Mide primariamente el

volumen de las partículas

• Un ángulo de 90° -side

scatter SS

– Mide la complejidad de

la partícula

– Florescencia