DESARROLLO DE UNA MICROPLACA DE ELISA.

DESARROLLO DE UNA MICROPLACA DE ELISA INDIRECTA PARA MEDIR EL CORTISOL EN TELEÓSTEOS, Y EVALUACIÓN DE LA RESPUESTA AL ESTRÉS IN LA TRUCHA ARCOÍRIS Y LA DORADA.

César Alejandro Lucano Ramírez

Dentro de los sistemas naturales y controlados los animales están expuestos a diversos tipos de estímulos y respuestas, una de las respuestas importantes a cualquier estímulo es el estrés, el cual es un indicador que nos señala si la calidad o las condiciones del sistema no son óptimas para los organismos. Los teleósteos responden fisiológicamente de diversas maneras para tratar de amortiguar el estrés, las denominadas respuestas primarias, secundarias y terciarias, del cual las primarias pueden ser evaluadas midiendo los cambios de las concentraciones del cortisol en el plasma sanguíneo.

Para hacer este tipo de mediciones Tintos et al (2006) desarrollaron una técnica para medir los niveles de cortisol mediante la prueba indirecta de la ELISA. Básicamente la función de la ELISA es el detectar un antígeno, en este caso el cortisol, mediante un anticuerpo ligado a una enzima, la cual genera un producto que es detectado debido al el cambio de color de la solución, la magnitud del cambio de color es directamente proporcional a la concentración de la sustancia medida.

Tintos et al. (2006) utilizaron un anticuerpo ligado a una enzima producida por ellos, el cortiso-3-carboxymetil oxima, y llevar a cabo esta reacción. Para conocer si el desarrollo de la ELISA fue óptimo a la hora medir el cortisol en los teleósteos, por ello se llevaron a cabo diversas pruebas, tales como conocer la especificidad de la reacción: evaluándola con diferentes esteroides (11-deoxy cortisol, progesterona, corticosterona, 17 β-oestradiol, cortisona, testosterona); comprobando el comportamiento de la reacción: hecho con diferentes concentraciones de cortisol, en una solución estándar y con diferentes especies (paralelismo) provocándoles estrés mediante diversos métodos (por exposición al aire, por aumento de densidad de organismos en el stock, por persecución); así como medir la concentración con diferentes grados de estrés.

El método resulto ser adecuado para lo que fue diseñado, ya que cumplió con los diferentes estándares requeridos (especificidad, reproductibilidad, precisión y exactitud) para un análisis como estos. Los resultados de la medición del cortisol fueron comparados con los reportados en otros estudios para lo cual el resultado fue similar. Así mismo se obtuvo que la reproductibilidad de este método es mejor que la de otros utilizados hasta el momento.

La gran importancia de este tipo de métodos es la aplicación que puede tener para diversos fines, considero que el más importantes de ellos es el estimar el nivel de estrés sobre estos organismos en sistemas naturales, es decir, con este tipo de pruebas podemos conocer el grado de impacto que tiene

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