DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD.
Enviado por af.hernandez14 • 3 de Febrero de 2016 • Informes • 432 Palabras (2 Páginas) • 212 Visitas
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD
(no sacar esta hoja)
Blanco: Este tubo no contiene proteína, se reemplaza la muestra por agua y se le agrega el correspondiente volumen de reactivo. Se realiza para determinar la absorbancia del reactivo, este valor se descuenta de la absorbancia del resto de los tubos.
Curva de calibración: Para su realización se utilizará la solución testigo de concentración conocida. Con la medida de absorbancia de cada tubo y conociendo la cantidad de proteínas que contiene cada uno de los tubos, es posible realizar una curva de calibración (gráfico A595 vs μg de proteína). Es necesario realizarla cada vez que se procesen las muestras. La concentración del TESTIGO es 100 μg/ml.
Muestra incógnita: se procesa en simultáneo y en las mismas condiciones que la curva de calibración. El tubo contiene la muestra y la misma cantidad de reactivos que los anteriores. Para conocer la cantidad de proteínas de la muestra (μg), se determina la absorbancia de la misma y se interpola en la curva de calibración. Cada grupo procesa una sola Muestra incógnita (A o B).
Protocolo:
Tubo | H2O (μl) | Testigo (μl) | Muestra A o B (μl) | Reactivo de Bradford (ml) | Proteína (μg) | Absorbancia a 595 nm |
Blanco | 600 | -------- | ---------- | 2 | ||
1 | 450 | 150 | ---------- | 2 | ||
2 | 300 | 300 | ---------- | 2 | ||
3 | -------- | 600 | ---------- | 2 | ||
Muestra A o B | -------- | ------- | 600 | 2 |
Procedimiento:
Pipetear en el orden de la tabla:
- Primero el AGUA con la pipeta de 1 ml (rotulada H2O).
- El TESTIGO con otra pipeta de 1 ml (rotulada T) respetando el orden de los tubos: 1,2 y 3.
- Luego con otra pipeta de 1 ml (rotulada A o B según corresponda) la MUESTRA INCÓGNITA en su tubo correspondiente.
-Por último, el reactivo de Bradford con la pipeta de 5 ml (rotulada R).
- Mezclar el contenido de los tubos.
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