Determinación de Proteína por el Método de Biuret.
Enviado por Núcleo Supraóptico • 17 de Marzo de 2016 • Prácticas o problemas • 658 Palabras (3 Páginas) • 674 Visitas
Centro De Ciencias Básicas.
Departamento de Química.
Materia: Bioquímica.
“Determinación de Proteína por el Método de Biuret.”
RESULTADOS:
[pic 1]
Tubo | [ ] de Problema mg/ml | Absorbancia (Abs) |
2 | .33 | .078 |
Problema | .4919 | .120 |
3 | .66 | .167 |
4 | 1 | .240 |
5 | 1.33 | .325 |
DISCUSIONES:
El método de Biuret se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico.5 Como vimos en clase la intensidad de coloración (Absorbancia) es directamente proporcional a la cantidad de proteínas y la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero) aunque como también se comentó en clase que rara vez si existe presencia de amonio puede modificar los resultados cambiando el color.
La Ley Lambert Beer es un medio matemático de expresar cómo la materia absorbe la luz.6 Este tiene tres variables y se expresa por la fórmula:
A = εdc
Dónde:
A = | Absorbencia |
ε = | Coeficiente molar de extinción |
d = | Distancia en cm |
c = | Concentración molar |
Para utilizar esta fórmula se debía despejar la concentración molar pero se desconocía el cociente molar de extinción. Por ende se necesitó una nueva fórmula proporcionada por la maestra donde se obtenía la concentración de proteína dividiendo el producto de la concentración de la solución patrón (8mg/dl) por los mililitros de albumina en cada tubo (solución patrón de proteína) entre los mililitros totales de solución. De este modo logramos calcular la proteína para poder graficar.
La espectrometría consiste en la medida de la potencia de estas radiaciones como medio para obtener información sobre los sistemas.1 Tomando como base lo anterior utilizamos un espectrofotómetro que media la longitud de onda de la muestra calibrándolo a 540 nm. El espectrofotómetro es un aparato ya poco utilizado ya que conlleva mucho cuidado el uso de esta máquina y se debe calibrar con distintas longitudes de onda al igual que crear un blanco y esto lleva demasiado tiempo y mucho cuidado.
El cuidado al realizar la práctica es principalmente leer la sustancia en el espectrofotómetro ya que al ensuciar la celdilla, colocarla mal, una mala calibración, un blanco inadecuado, dejar abierta la tapa son algunos de los factores que pueden alterar el resultado y con ello toda la práctica.
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