Determinacion de proteinas por el método de Lowry

Instituto Politécnico Nacional[pic 1][pic 2]

Escuela nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Métodos de Análisis

Determinación de proteínas por el método de Lowry

Profesor: Francisco Fernández López

Alumna:

Chato morris gutierrez

Grupo: 4IM1               Semestre: 15/2        Sección: 3

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OBJETIVOS:

1. Elaborar una curva de calibración para la cuantificación de proteínas empleando un método fotométrico.
2. Determinar si hay diferencia estadísticamente significativa en la precisión y exactitud entre los métodos de Bradford y Lowry.
3. Conocer el efecto de sustancias no proteicas, en el desarrollo de color.
4. Analizar las ventajas y desventajas del método de Lowry, con respecto a otros métodos para la cuantificación de proteínas.  

FUNDAMENTO:

El método de Lowry utiliza tres sistemas para producir coloración por la presencia de proteínas. En primer lugar, el Cu+, forma complejos de coordinación con dos enlaces peptidicos consecutivos de las proteínas, dando lugar a un compuesto coloreado azul.  En segundo lugar, este compuesto es capaz de reducir el reactivo de Folin-Ciocalteu (ácido fosfotungstico y fosfomolibdico), dando un color mas azulado. Por último, el reactivo de Folin-Ciocalteu también reacciona con los restos tirosinil (residuos de tirosina) de la cadena polipeptidica, produciendo así mismo un color azul por la reducción de fosfomolibdato en  medio básico.

RESULTADOS:

Tabla 1. Curva de calibración de albúmina

Tabla 2. Resultados de la regresión lineal

[pic 4]                             Grafica 1. Representación de la curva de calibración.

De la ecuación de la curva y=0.001586x - 0.0139 donde y es la absorbancia y x la concentración de proteína, despejando a x obtenemos; x= .[pic 5]

Tabla 3. Replicas para el análisis estadístico obtenidas con la ecuación de la curva.

Tabla 4. Resultados del análisis estadístico realizado con las concentraciones obtenidas.

 μ = X͞    ±             t: “t” tablas (2.262)[pic 6]

     μ = 80.10   ±        μ = 80.10  ± 4.12   [pic 7]

  %C.V. =  x 100         %C.V. =  x 100 = 7.24 %[pic 8][pic 9]

Tabla 5. Efecto de algunas sustancias no proteicas que interfieren en el método de Bradford.

Tabla 6. Comparación del método de Lowry con otros métodos de determinación de proteína (ventajas y desventajas)

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