Determinacion de proteinas por el método de Lowry
Enviado por ferchato • 12 de Abril de 2016 • Ensayos • 1.074 Palabras (5 Páginas) • 1.045 Visitas
Instituto Politécnico Nacional[pic 1][pic 2]
Escuela nacional de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Métodos de Análisis
Determinación de proteínas por el método de Lowry
Profesor: Francisco Fernández López
Alumna:
Chato morris gutierrez
Grupo: 4IM1 Semestre: 15/2 Sección: 3
[pic 3]
OBJETIVOS:
- Elaborar una curva de calibración para la cuantificación de proteínas empleando un método fotométrico.
- Determinar si hay diferencia estadísticamente significativa en la precisión y exactitud entre los métodos de Bradford y Lowry.
- Conocer el efecto de sustancias no proteicas, en el desarrollo de color.
- Analizar las ventajas y desventajas del método de Lowry, con respecto a otros métodos para la cuantificación de proteínas.
FUNDAMENTO:
El método de Lowry utiliza tres sistemas para producir coloración por la presencia de proteínas. En primer lugar, el Cu+, forma complejos de coordinación con dos enlaces peptidicos consecutivos de las proteínas, dando lugar a un compuesto coloreado azul. En segundo lugar, este compuesto es capaz de reducir el reactivo de Folin-Ciocalteu (ácido fosfotungstico y fosfomolibdico), dando un color mas azulado. Por último, el reactivo de Folin-Ciocalteu también reacciona con los restos tirosinil (residuos de tirosina) de la cadena polipeptidica, produciendo así mismo un color azul por la reducción de fosfomolibdato en medio básico.
RESULTADOS:
Tabla 1. Curva de calibración de albúmina
Tubo No. | Cantidad de proteína (μg) | A595 | |
Serie a | Serie b | ||
1 | 25 | 0.023 | 0.029 |
2 | 50 | 0.080 | 0.043 |
3 | 75 | 0.119 | 0.110 |
4 | 100 | 0.142 | 0.130 |
5 | 125 | 0.186 | 0.188 |
Tabla 2. Resultados de la regresión lineal
Aplicando la regresión lineal a la curva graficada | |
R | 0.9815 |
A | 0.001586 |
B | -0.0139 |
[pic 4] Grafica 1. Representación de la curva de calibración.
De la ecuación de la curva y=0.001586x - 0.0139 donde y es la absorbancia y x la concentración de proteína, despejando a x obtenemos; x= .[pic 5]
Tabla 3. Replicas para el análisis estadístico obtenidas con la ecuación de la curva.
Tubo No. | A595 | Cantidad de proteína (x); (μg) |
1 | 0.132 | 92.0239 |
2 | 0.110 | 78.1525 |
3 | 0.124 | 86.9798 |
4 | 0.121 | 85.0882 |
5 | 0.107 | 76.2610 |
6 | 0.104 | 74.3648 |
7 | 0.108 | 76.8915 |
8 | 0.108 | 76.8915 |
9 | 0.108 | 76.8915 |
10 | 0.109 | 77.5215 |
Tabla 4. Resultados del análisis estadístico realizado con las concentraciones obtenidas.
X͞ | S | S2 | %C.V. | μ |
80.1070 | 5.8051 | 33.6991 | 7.2466 | 75.95-84.25 |
μ = X͞ ± t: “t” tablas (2.262)[pic 6]
μ = 80.10 ± μ = 80.10 ± 4.12 [pic 7]
%C.V. = x 100 %C.V. = x 100 = 7.24 %[pic 8][pic 9]
Tabla 5. Efecto de algunas sustancias no proteicas que interfieren en el método de Bradford.
Tubo No. | sustancia | A595 | Cantidad de proteína | Tipo de interferencia generada |
1 | Tris 1M, pH 7.0 | 0.156 | 107.15 | Positiva |
2 | Glicerol al 1% (v/v) | 0.147 | 101.48 | Positiva |
3 | Detergente comercial al 1% | 0.161 | 110.30 | Positiva |
4 | Dodecil sulfato de sodio al 1% | 0.134 | 93.28 | Positiva |
5 | Ácido tricloroacético al 5% | 0.129 | 90.13 | Positiva |
Tabla 6. Comparación del método de Lowry con otros métodos de determinación de proteína (ventajas y desventajas)
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