ENSAYO SOBRE ADN

• Colegio Superior del Maipo[pic 1]
• Biología

Extracción de ADN

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Profesor: Félix Ormazábal

Fecha: 13/5/2019

Alumno: Bastián Marín

Introducción:

Como todos sabemos el ADN esta presente en animales y en células vegetales demostrado gracias a varios experimentos realizados sobre ¿Qué es lo que llevaba la información genética? dentro de un animal, una planta, una bacteria, un ser humano, un perro, etc.

En este experimento realizado en clase nosotros intentaremos separar el ADN de una planta, que fue elegida una Coliflor su zona más específica que sería su cabeza, la cual contendría más ADN y sería lo más fácil de separar (Comparándolo con su tallo), y para el ADN animal usaremos la misma sangre de nuestro cuerpo, la cual sacaremos con una aguja (lo más fina posible).

Para llegar al ADN usaremos la diferencia de densidades de cada sustancia que tendremos en nuestro tubo de ensayo en el momento del experimento, y así poder apreciar el ADN extraído de la sangra y la coliflor.

Como objetivos de este informe y experimento serán:

• Saber si podremos separar exitosamente el ADN animal y vegetal.
• Observar si hay alguna diferencia entre ADN animal y vegetal.
• Saber si hay diferencia en la cantidad de ADN animal y vegetal.

Marco Teórico:

En este experimento nos basaremos en las diferencias de densidades de los materiales que usaremos (Lavaloza, Coliflor, Alcohol, etc.) quedando teóricamente un tubo de ensayo con estas proporciones de sustancias en él.

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Aprovecharemos también el lavaloza para disgregar la membrana celular que en si es una doble capa de lípido que podemos disgregar con el lavaloza.[pic 4]

Sabiendo que el lavaloza quedara en lo mas profundo por ser mas denso y bajando el nivel de densidad cada vez que subimos en el tubo de ensayo hasta llegar al alcohol con azul de metileno el cual usaremos para teñir el ADN por su característica de ser de pH alcalino o básico que es capar de teñir los componentes ácidos que seria en este caso el ADN gracias que a su estructura de aminoácidos (pH Ácido) la cual tomara color del tinte.

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Hipótesis:

• El ADN quedara reposado entre el Alcohol + azul de metileno y las sobras de la muestra.
• La cantidad de ADN Humano será menor que la cantidad de ADN Vegetal.
• No se notarán diferencias entre ADN Humano y ADN Vegetal por su misma composición de moléculas.
• Los ADN tendrán diferencias apreciables en el tubo de ensayo.

Metodología:

Materiales:

• Materiales Biológicos:

• Trozo crudo de coliflor (aprox 10gr)
• Sangre Humana

• Mortero de madera (preferiblemente usado)
• Sal Común
• Paquete pequeño de algodón
• 5 trozos de gasa 10x10cm.
• Plumón permanente para rotular tubos de ensayo
• Gradilla
• Aguja fina
• Toalla de papel absorbente
• Lavaloza común
• Botella pequeña de alcohol

Materiales en laboratorio:

• Tubos de ensayo (5)
• Vaso precipitado (1)
• Azul de metileno

Procedimiento:

1. Colocar en el mortero la coliflor, con un poco de agua y una pizca de sal hasta formar una papilla muy homogénea sin que se noten trozos de coliflor en ella. Esta parte del procedimiento es para tratar de separar los tejidos que forman a la coliflor y aislar células. El agua y la sal permitirá dejar una solución isotónica en la que las células no pueden deshidratarse ni realizar una lisis celular por entrada de agua al ocurrir osmosis.
2. Poner sobre la mano el trozo de gasa de manera que cubra el espacio que se forma entre el índice y el pulgar cuando se tocan ambas yemas de los dedos. Sobre la gasa colocar el algodón.
3. Vaciar sobre el algodón la mezcla de coliflor.
4. Filtrar la mezcla en la gasa y el algodón sobre un tubo de ensayo de manera que no pasen partículas sólidas, solo líquidos. Aquí estamos tratando de separar definitivamente las células aisladas con el homogeneizado anterior de restos de tejido entero que quedaran atrapados en el algodón y la gasa,
5. En los tubos de ensayo con la mezcla agregar una cantidad de lavaloza equivalente a un tercio aproximadamente del líquido obtenido por filtración. Las membranas de las células se encuentran formadas básicamente por una doble capa de lípidos que no fue destruida de forma mecánica en el mortero, así que debemos disgregarla utilizando para ello un líquido que actúe sobre esta grasa: lavaloza.
6. Mezclar muy suavemente la mezcla de manera que no se forme espuma colocando el pulgar sobre la enteada del tubo y realizando movimientos suaves para mezclar. Evitamos la presencia de espuma para hacer fácil la observación, la espuma podría entorpecer la aparición del ADN.
7. Dejar reposar la mezcla por 10 minuto, colocando el tubo sobre la gradilla y evitamos así tenerlo en la mano, el tiempo que se deja en reposo la mezcla es para que el lavaloza pueda actuar sobre la membrana.
8. Colocar la mitad del liquido obtenido en el otro tubo de ensayo. Esto paso es solo para evitar gastar materiales n exceso y para favorecer la observación en un tubo de ensayo, de lo contrario el volumen final obtenidos sería demasiado.
9. A unos de los tubos agregar el alcohol en una cantidad igual a la del líquido obtenido, de forma suave también. El alcohol no se mezcla con el resto del filtrado y formara una fase caracterizada por tener otra densidad y quedara sobre el filtrado. Al existir estas dos fases des diferentes densidades, el ADN deberá subir desde el filtrado hasta la false del alcohol, lo que se favorece aún más si el alcohol está más frio.
10. Agregar 2 gotas de azul de metileno y observar la tinción que ocurre. El azul de metileno es una sustancia caracterizada por presentar un pH alcalino o básico, de manera que es capaz de teñir las sustancias acidas como el ADN.
11. Coloqué un tercio de agua en un tubo de ensayo y agregué gotas de sangre (a más gotas de sangre más ADN que se obtiene).
12. Repetir procedimiento realizado con la coliflor.

Resultados: Se pudo separar el ADN como se esperaba en el experimento realiazado, notando la limitacion del tinte por una barrera como “invisble” que seria el ADN.[pic 6]

Aparamente no se ve diferencia en los ADN de una vista superficial.

Fotografia tubos de ensayo finalizado el experimento.

ADN Vegetal:

Fotografía 1[pic 7]

Se puede aparentemente ver una capa de color mas suave en entre los residuos y la capa de alcohol más azul de metileno.

Fotografía 2[pic 8]

Se aprecia casi lo mismo que en la anterior solo que en esta se ve en forma mas redondas o como pelotitas.

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