Examen En Fresco De Microorganismos. Preparación De Un Frotis Bacteriano Y Tinción Simple.

Examen en Fresco de Microorganismos.

Preparación de un Frotis Bacteriano y Tinción Simple.

I. Examen en fresco de Microorganismos.

Introducción.

Los exámenes en fresco si constituyen un arma potente de diagnóstico en las infecciones producidas por parásitos intestinales. Pueden detectarse huevos, quistes y trofozoitos que por sus características morfológicas pueden generar por si solas un diagnóstico definitivo. Las muestras de heces deben pretratarse antes de realizar la preparación en fresco con el fin de aclarar y concentrar los parásitos.

El examen en fresco, es el más común de los procedimientos para la observación microscópica de los hongos, tanto a partir de productos biológicos como de su desarrollo en medios de cultivo. A través del examen directo se establece el diagnóstico en la mayoría de las micosis, ya que la morfología de cada hongo en estado parasitario es, en general, muy característico.

El examen directo es sencillo, rápido y económico. Permite observar al hongo sin modificaciones y cuantificar la cantidad de elementos micóticos existentes en la muestra. Se efectúa a partir de productos anatomopatológicos como escamas, pelos y exudados, así como expectoración y otros líquidos.

La observación de frotis teñidos es mas recomendable. El frotis se prepara haciendo una extensión de los microorganismos sobre una superficie transparente, en el cual se fijan y se tiñen los microorganismos. De acuerdo al numero de soluciones colorantes y a los objetivos de estudio se pueden realizar diferentes tipos de tinciones como son: simple, diferencial negativa y selectiva.

Los frotis de cultivos líquidos se deberán fijar con alcohol para evitar residuos del medio. que al quemarse darán interferencias en las observaciones y las colonia de medios sólidos se fijan generalmente con calor. Después de la fijacion, los frotis son teñidos con diferentes colorantes sintéticos derivados de anilina

Objetivos.

1. Observar microorganismos vivos y poder estudiar su morfología y color (si lo tienen) en las condiciones más cercanas a la realidad.

2. Observar diferentes clases de movimientos microbianos.

3. Aprender a emplear correctamente el microscopio.

Material Necesario (por equipo).

2 Mecheros Bunsen.

3 asas bacteriológicas.

1 portaobjetos con cubreobjetos o portaobjetos excavados (por persona).

Muestra (por ejemplo agua de un charco).

Microscopio y aceite de inmersión.

Procedimiento.

1. Tomar una gota de la muestra con el asa bacteriológica previamente flameada y depositarla en el portaobjetos.

2. Colocar el cubreobjetos. Para evitar burbujas depositar el cubreobjetos sobre la gota: primero una arista y luego todo él.

3. Observar al microscopio. El calor desprendido por el foco luminoso irá secando progresivamente la preparación; como consecuencia, los microorganismos se irán paralizando y, además, pueden aparecer corrientes de líquido que dificultarán la observación de la muestra. Cuando se observen estos efectos, levantar el cubreobjetos y añadir más líquido. Como alternativa, se puede aplicar parafina en los bordes del cubreobjetos.

4. Dibujar detalladamente los diferentes tipos morfológicos y describir sus movimientos.

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Actividades.

1. Señale las ventajas y desventajas del examen en fresco.

Ventajas: observar la morfología de las bacterias vivas.

Desventajas: Las bacterias vivas son casi incoloras y no tienen suficiente contraste con el agua en el cual están suspendidas.

2. ¿Por qué se cubre la muestra con un cubreobjetos?

Para protegerla y facilitar su observación.

3. ¿Cuáles

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