PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO Facultad de Ciencias naturales e Ingeniería

 PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO

Giraldo, Camila1., Monroy, Johan2., Tirado, Camila3., Vargas, Daniela4 y Cataño, Fernanda5.

Fundación universitaria de San Gil Unisangil sede Yopal

Facultad de Ciencias naturales e Ingeniería

Ingeniería Ambiental

Yopal, Casanare, Colombia

mcamilagc01@hotmail.com

johan.mo_o7o7@hotmail.com

mtirado27@hotmail.com

nanielavargas@hotmail.com

luferziita68@hotmail.com

Resumen — En la práctica número 4 del laboratorio de biología general se llevó acabo la realización de un frotis bacteriano de yogur, vinagre y sarro dental a los cuales se les realizó un proceso tinción para identificar el tipo de bacterias presentes en cada  muestra y clasificar las como Gam positivas o Gram negativas según el color final que tuviera la muestra.

Palabras clave— bacterias, frotis, tinción, Gram positivo, Gram negativo.

Abstract - In practice number 4 laboratory general biology was just carrying out a bacterial smear yogurt, vinegar and tartar to which underwent a process staining to identify the type of bacteria present in each sample and classify as Gam Gram positive or negative depending on the final color that had the sample

Keywords- bacteria, smears, staining, Gram positive, Gram negative.

1. INTRODUCCION

Un frotis bacteriano, es la extensión que se realiza sobre un portaobjeto de una muestra o cultivo con el objetivo de separar lo más posible los microrganismos ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de esta extensión bacteriana puede causar que estas bacterias queden inactivas y adheridos al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudieran existir. Al poner en contacto una célula bacteriana con un colorante, ocurre un intercambio de iones entre el colorante y los sitios activos de la superficie o del interior de la célula. Los iones teñidos del colorante reemplazan a los iones de los componentes celulares.

Coloración de Gram

Está clasificada como una coloración compuesta y diferencial, para este proceso se utilizan dos colorantes: el cristal violeta y la fuscina básica, y dependiendo del colorante que toma la pared bacteriana y dos grandes categorías denominadas: Gram positivas (se tiñen de cristal violeta) y las de Gram negativas (toman el color fuscina básica)

1. OBJETIVO

Reconocer el tipo de bacterias presentes en el sarro dental, el yogur y el vinagre por medio de la utilización de colorantes y una buena preparación de frotis bacteriano.

1. PROCEDIMIENTO

1. MATERIALES A UTILIZAR

Tabla 1

Fuente: Autores

1. REACTIVOS A UTILIZAR

Tabla 2

Fuente: Autores

1. EXPERIENCIAS

1. Frotis bacteriano del  yogur:

Antes de preparar el frotis bacteriano del yogur se colocó una pequeña gota de agua con ayuda del asa de siembra, en el centro de un portaobjetos limpio y seco; luego se tomó una muestra de yogur y se expandió en el portaobjetos  mezclándola bien con el agua.

Se dejó secar pasando tres veces el portaobjetos sobre el mechero encendido, luego se añadió unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca, se retiró el exceso de metanol para luego dejar evaporar el líquido.

1. Frotis bacteriano del  vinagre:

Así mismo, antes de preparar el frotis del vinagre se colocó en el centro del portaobjetos una gota de agua con ayuda de un asa de siembra, luego de tomó la muestra  de vinagre y se expandió en el portaobjetos mezclándola con agua.

Al igual que con la muestra de yogur se dejó secar la preparación del vinagre pasando el portaobjetos sobre el mechero, pero no se aplicó metanol

1. Frotis bacteriano del  sarro:

Sobre el portaobjetos limpio y seco de aplicó, con ayuda de un asa de siembra, una gota de agua en el centro, luego con un palillo de dientes se agregó una porción de sarro dental y se expandió mezclándola con el agua.

Seguidamente se dejó secar la preparación pasándola tres veces sobre el mechero.

Para la tinción de los frotis bacterianos se siguió  los siguientes pasos descritos en la guía de laboratorio:

1. Preparar los frotis bacterianos.
2. Teñir con cristal violeta 1min.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Cubrir con Lugol 1min.
5. Lavar con agua el exceso de Lugol.
6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30seg)
7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
8. Teñir con safranina 1min.
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
10. Secar la preparación.
11. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación.

1. ANÁLISIS Y RESULTADOS

1. Bacterias del yogur.

Una vez realizada la debida preparación del frotis bacteriano, en donde se fijó y se tiño para así poder identificar todas las estructuras de las diferentes bacterias; se colocó en el microscopio y se pudo observar que según el color del tinte que quedo marcado en la muestra del frotis era Gram positiva ya que adquirió color violeta; las bacterias que se encuentran en el yogurt son Lactobacilos búlgaros, Streptococcus thermophilus, y Bacilos. Las bacterias mencionadas anteriormente no lograron ser reconocidas en el frotis.

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