Fiebre

La fiebre chikungunya es una enfermedad vírica transmitida al ser humano por mosquitos infectados. Aunque la enfermedad se da principalmente en África, Asia y el subcontinente indio, en los últimos decenios los vectores de la enfermedad se han propagado a Europa y las Américas. Taxonómicamente, se trata de un virus ARN del género alfavirus, familia Togaviridae. Además de fiebre y fuertes dolores articulares, produce otros síntomas, tales como dolores musculares, dolores de cabeza, náuseas, cansancio y erupciones cutáneas (OMS, 2014). Aunque no se conocen los receptores que se encuentran en las células humanas que posibilitan la inserción del virus al interior de las células del huésped, se sabe que moléculas como la proteína NRAMP (natural resistance-associated macrophage protein) se encuentran asociadas con la adhesión de otros virus a las células del huésped (Tang BL, 2012).

Dado que el virus se encuentra en Colombia y ha producido unos 5000 casos de fiebre chikungunya a lo largo de este año, las entidades de salud del país le confieren a usted la tarea de investigar cómo se da el proceso de infección del virus en las células huésped humanas. Para ello, usted dispone de la línea celular de fibroblastos humanos HDFa y del virus. Para investigar el proceso de infección del virus en las células de fibroblastos humanos in vitro, usted cultivará las células en presencia del virus.

¿De que tipo de tejido fueron inicialmente aisladas estas células? ¿A qué temperatura, concentración de oxigeno y CO2 las cultivaría en una incubadora?

Las células fueron aisladas del tejido conjuntivo sostenimiento y la integración sistemática del organismo.

El medio gaseoso para mantener un pH viable para cultivar este tipo de células es :

O2 21%

conservar a temperatura de 36ºC a una humedad relativa de 95 - 98% para evitar la desecación del cultivo.

¿Una vez usted ponga las células en cultivo en un frasco de cultivo celular y las células hayan proliferado llenando todo el frasco, cuales serán las limitantes para que las células no puedan seguir dividiéndose y la población celular no crezca de forma exponencial?

Al ser células sustrato dependientes detienen su proceso de división celular al tocar la membrana de una célula adyacente pH por encima de 7,7 son las causa mas frecuentes de muerte o decrecimiento en un cultivo celular.

¿Con el fin de dilucidar si la proteína NRAMP se encuentra involucrada en la penetración de virus al interior de la células de fibroblastos humanos que técnicas puede utilizar para visualizar con un microscopio de fluorescencia, la localización celular de las proteína NRAMP?

INMUNOFLUORESCENCIA (IF)

Es una técnica que emplea anticuerpos a fluorocromos; este inmunomarcaje el cual hace uso de marcadores fluorescentes para visualizar y localizar los anticuerpos en células o secciones del tejido

la muestra se incuba con el sustrato antigénico, si los anticuerpos buscados se encuentran en la muestra al sustrato, formando un complejo inmune estable antígeno-anticuerpo este complejo es incubado con el trasador fluorescente o conjugado, un suero antigamaglobulina humana marcado con isotiocianato de fluoresceína el producto de este se lava eliminando el sobrante del conjugado y se obtiene sustrato-anticuerpo-conjugado listo para ver en el microscopio

¿Una vez usted tenga marcada la proteína NRAMP de manera fluorescente, que técnica puede utilizar para estudiar si esta proteína presenta un movimiento en la membrana celular, luego de la infección?

Recuperación de Fluorescencia Posterior al Foto-blanqueamiento (FRAP)

La movilidad lateral de las proteínas de la membrana se puede

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