Floris Faringeo

FLOTIS FARINGEO

Limpiar con alcohol la lamina

Billete MFF, fecha, nombre, hacer un cuadro indicando la muestra con lápiz graso

Encender el mechero y pasarla 3 veces para esterilizar

Se pone la lámina a la par del mechero para colocar la muestra y para que se seque y para que se adhiera

Coloración con gotero o jeringa

COLORACION DE GRAM:

Es posiblemente la tinción más usada.

Inventada por Christian Gram (150-1938) en 1884.

Permite diferenciar a las bacterias de acuerdo a la estructura de su pared bacteriana en Gram positivas y Gram negativas.

las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias). Descripta en forma breve, la secuencia de la tinción es la siguiente:

Apartir de un frotis previamente fijado efectuar la coloración

Cubrir el Frotis fijado con calor se teñí por 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con solución dubol durante 1 min. y se lava de nuevo con agua, cubrir el frotiscon alcohol etílico. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 30 seg.. Lavar y secar a temperatura ambiente. Para luego observarlo con 1 o 2 gotas de aseite de inmersor parar observalo al 100x

Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.. La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la células gram-negativa es peptidoglicano.

Lamentablemente no pude ver en el microscopio algunas de estas células que íbamos a ver así que me puse a investigar y estos son algunos ejemplo que íbamos a divisar .

Conclusión:

Tanto las bacterias Gram Positivas Como las Bacterias Gram negativas se Presentan morfológicamente Como cocos o bacilos, sin embargo al ejecutar tinción de Gram en estas para identificar su grupo taxonómico, las Gram Positivas se Tiñen de violeta de color Mientras las Que las Gram negativas se Tiñen de. De color rosado Mediante la tinción de Gram se identifican bacterias Gram Positivas y Gram negativas gracias al color de Que tornan Después De Ser Teñidas; En El Caso De Las bacterias Gram Positivas se Tiñen de violeta, esto se debe una cola gracias una cola contienen Una comparación gruesa de peptidoglicano y Gran Cantidad de ácidos teicóicos Que permiten Fijar y alejar rápidamente el colorante inicial el es Cual, el cristal violeta de Huc Kerry : Además fija Resistentes a la decoloración. Lo contrario Ocurre con El caso de las negativas Gram, las Cuales poseen una pared delgada con menos cantidad de peptidoglicano y lípidos, la cual requiere de un colorante de contra tinción como la safranina o la fucsina en este caso, ya que el colorante inicial es fácilmente retirado en la decoloración con alcohol, debido a que por su delgada pared celular no lo retienen. La tinción de Gram permite conocer la morfología celular, el tamaño, la forma y su clasificación taxonómica (Gram positivos o Gram negativos) de acuerdo al color que tornan las bacterias después de la tinción, sin embargo no permite conocer la especie o género de la bacteria al cual pertenece.

Recomendaciones:

Más atención a los alumnos a la hora de las prácticas.

Ayuda de parte de los instructores en la explicación de algunos procedimientos.

Organización de uso de materiales a la hora de estar en el laboratorio (ej. El microscopio fueron pocos quien los usaron).

Poner normas dentro del laboratorio.

Poner letreros de uso correcto a la hora de usar el mechero.

Anexos :

El microscopio es un instrumento óptico que amplifica la imagen de un objeto pequeño. Mediante un sistema de lentes y fuentes de iluminación se puede hacer visible un objeto microscópico. Los microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el tamaño original. Actualmente existen dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. En el microscopio óptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El microscopio electrónico utiliza un rayo de electrones controlado por un campo magnético. Los microscopios ópticos generalmente producen un aumento de 1000 veces el tamaño original. El límite lo tienen en unas 2000 veces.

REACCION Y COLORACION DE LAS BACTERIAS

Paso del proceso GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS

Solución de Cristal Violeta al 1%. Se deja actuar 1 minuto

Células color violeta

Células color violeta

Solución Yodo- Iodurada. Se deja actuar 1 a 2 minutos Formación del complejo Yodo Formación del complejo Yodo Cristal Violeta en el interior de las células Las células permanecen violetas Formación del complejo Yodo Cristal Violeta en el interior de las células Las células permanecen violetas

Solución de alcohol Acetona. Se deja actuar 20 Segundos El complejo Yodo – Cristal Violeta no sale de las Células, las que conservan el color violeta. El complejo Yodo – Cristal Violeta se separa de las Células, las que pierden el Color y no pueden observarse

Solución de Safranina. Se deja actuar 1 a 2 Minutos Las células conservan el Color Violeta células decoloradas se Tiñen de rojo.

Lavar, secar y observar al microscopio.

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