Fraccionamiento Celular

Fraccionamiento celular

El fraccionamiento celular es usado para investigar la bioquímica y fisiología de organelos fuera del ambiente complejo de la célula intacta.El fraccionamiento celular permite separar los componentes de las células. Las membranas y organelos celulares.

Es necesario un procedimiento para liberar los componentes celulares en forma soluble de la célula intactos o de la estructura del tejido sin provocar pérdidas de actividad. Normalmente se emplea la trituración mecánica u homogeneización de los tejidos animales para romper las membranas celulares y liberar los contenidos celulares. Con las bacterias, las levaduras y muchas células vegetales, se necesitan procedimientos mucho más vigorosos para romper las gruesas paredes celulares, por ejemplo la radiación sónica, la trituración o la fragmentación en una prensa de elevada presión. A veces la pared celular puede ser debilitada por medio de un tratamiento con ciertas enzimas.

La homogeneización es un término que se utiliza en muchos capos como en química, ciencias agrícolas, tecnología de alimentos y biología celular.

La homogeneización se trata de disgregar los tejidos y romper las células con el menor daño a la membrana plasmática y los orgánulos celulares.

La centrifugación es una técnica de separación y purificación, se utiliza para separar o aislar partículas aprovechando sus distintas velocidades de sedimentación. La centrifugación diferencial se basa en la diferencia de la densidad de las moléculas. Al realizar la centrifugación se obtienen fracciones enriquecidas

100g X 10min. Fracción nuclear

10 000g X 15 o 20 min. Fracción mitocondrial:

Mitocondrias

lisosomas

peroxisomas

80 000 a 100 000g X 1 hora Fracción microsomal:

microsomas

vesículas pequeñas

sobrenadante:

ribosomas

virus

macromoléculas

Ultracentrifugación 150 000g Para concentrar los iones

El parámetro según el cual se separan las moléculas y las partículas en este tipo de centrifugación es su coeficiente de sedimentación (s); éste es un reflejo de la forma y el tamaño de la molécula o partícula, y de él depende la velocidad con la que ésta sedimenta.

El coeficiente de sedimentación, s, se define como la razón entre la velocidad V a la que sedimenta la molécula (o partícula, en general) y la aceleración centrífuga aplicada, C. Este coeficiente se relaciona con el radio y la densidad de la molécula, y con la densidad y viscosidad del medio.

Fórmula para pasar de rpm a g: r^2 (rpm) Si pueden revisen a ver si está bien, esta nos la dio parra XD.

Homogeneización química: para la homogeneización química las sustancias más comúnmente usadas son:

detergentes: SDS- sulfato dodecil de sodio

Enzimáticos: como la lisozima, la proteinasa K,

triton

EDTA

Estos tienen la ventaja de ser mucho más específicos sobre todo para las paredes celulares y capsulas de bacterias. Este tipo de homogeneización se clasifica como suave, lo cual implica la alteración química de las cubiertas celulares, permeabilización que facilita la salida de los productos a estudiar.

ACETOCARMIN

Colorante a fin a las proteínas. El carmín acético o aceto carmín es uno de los colorantes más utilizados para la tincion de los cromosomas.El carmín se extrae de la hembra de Coccus cactis (homóptero, cochinilla), que vive sobre los cactus, se prepara básicamente empleando ácido acético glacial, el carmín en gramos, y normalmente se completa

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