Fraccionamiento Celular INTRODUCCIÓN

INTRODUCCIÓN

El fraccionamiento celular es un conjunto de métodos y técnicas que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular, ya sea éste un orgánulo.

Todo proceso de fraccionamiento celular consta de dos etapas: la rotura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones adecuadas para su purificación y la separación de la fracción deseada del resto de componentes de la célula o del tejido mediante algún criterio como puede ser una diferencia de densidad o la presencia de algún antígeno.

Los tejidos de los cuales se van a obtener el o los organelos se deben suspender en un medio apropiado para mantener la integridad de los organelos y enzimas de la célula durante el procedimiento de homogeneización (rompimiento de las células); todas las soluciones y cristalería deben mantenerse a 4°C para poder realizar un fraccionamiento celular adecuado.

Uno de los métodos más utilizados para el fraccionamiento celular es la centrifugación diferencial la cual es un proceso de separación que puede separar los componentes celulares por centrifugación repetida, a velocidades cada vez mayores. En estas condiciones, los componentes de la célula se separan en función de su tamaño y densidad: los componentes de gran tamaño y más densos migran más rápidamente hasta el fondo a velocidades relativamente bajas y forman un sedimento, de esta manera se obtienen primero los organelos de mayor tamaño en el núcleo, mientras que en las centrifugaciones posteriores con mayor fuerza gravitacional y mayor tiempo se obtienen organelos de menor tamaño hasta llegar a la obtención del citosol el cual es un líquido complejo que contiene los elementos del citoesqueleto y entre el 25-50% de las enzimas celulares.

Finalmente para confirmar la pureza de la fracción separada, el método más utilizado es tomar una muestra de la fracción y observar al microscopio y con ayuda de tinciones para poder observar los organelos o bien para determinar viabilidad celular .

OBJETIVO

Realizar de manera adecuada el fraccionamiento celular de una muestra de espinaca utilizando como métodos la homogeneización y la centrifugación diferencial para la obtención de sus organelos celulares.

METODOLOGÍA .

La indicada en el manual de Biología Celular, correspondiente a la práctica 7 “Fraccionamiento celular”, página, 75.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS.

Muestra

40x

100x

Tubo A

Tubo B

Tubo AU

Tubo BU

Muestra A + Acetocarmín

Observaciones: Tras realizar una centrifugación diferencial a diferentes velocidades y tiempos en cada tubo de ensaye, se logró observar organelos como: núcleo, membrana celular y algunos cloroplastos en los diferentes precipitados que se fueron formando, obteniendo así a velocidad de 1500 rpm el núcleo y la membrana celular, mientras que en la velocidad de 3500 rpm se obtuvieron los cloroplastos, esto se debe a la densidad que presenta cada organelo.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Para llevar a cabo la práctica de fraccionamiento celular en una muestra de espinaca,se realizó una homogeneización en las hojas de espinaca con ayuda de un mortero, utilizando con disolvente PBS el cual se emplea como vehículo neutro para células, ya que no modifica el perfil de expresión y funcionamiento celular normal, debido a esto, el uso de esta solución es muy común para lavar células a través

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