IDENTIFICACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE NEMATODES: ASCARIS, ENTEROBIUS Y TRICHURIS

PRÁCTICA Nº11:

IDENTIFICACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE NEMATODES: ASCARIS, ENTEROBIUS Y TRICHURIS

I. OBJETIVOS

 Realizar las técnicas específicas para la identificación de Nemátodes.

 Diferenciar los huevos de Ascaris, Enterobius y Trichuris.

 Realizar y reconocer la técnica de Faust y Método de Graham.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Los Nematelmintos, son gusanos redondos. La mayoría sólo tiene un huésped, el definitivo, pasando las larvas de un huésped a otro directamente o a través de un período de maduración en el exterior. Se transmiten por la ingestión de huevos maduros, larvas, o penetración de las larvas a través de la piel o mucosas.

En función de la localización del parásito en el huésped, se clasifican en tres grandes grupos: Intestinales, Tisulares y Filarias.

Dentro de las más importantes son las intestinales las cuales tenemos:

Enterobius vermicularis-Oxiuros: Se localizan en el intestino delgado. La sintomatología que presentan es como consecuencia de la puesta de huevos por la hembra en el ano: picor, insomnio, exfoliaciones como consecuencia del rascado. El diagnóstico se lleva a cabo mediante la realización de la prueba de Graham.

Ascaris lumbricoides: Es el agente etiológico de las Ascanidiasis. La infección se produce por la ingesta de huevos embrionados y posterior liberación de las larvas en el intestino. La migración tiene lugar por vía sanguínea, pasando por el hígado, corazón y pulmón. Cuando su tamaño les impide progresar, pasan a la faringe y se produce la deglución, pasando al intestino delgado. El cuadro clínico, cuando la parasitación es intensa, puede consistir en una bronconeumonía (fase pulmonar) o una obstrucción intestinal (fase intestinal). El diagnóstico se realiza mediante técnicas de sedimentación. En la fase pulmonar aparecen larvas en los esputos.

Trichuris trichura: Infecta al hombre por la ingestión de agua y alimentos contaminados. Da lugar a un cuadro clínico leve. Dependiendo del número de parásitos pueden dar lugar a lesiones en la mucosa o diarreas. El diagnóstico de laboratorio se lleva a cabo mediante la detección de los huevos en heces. Los huevos tienen una morfología característica con extremos prominentes, translúcidos al microscopio que les dan una apariencia de limón.

III. MATERIALES

a) Equipos

 Microscopio

 Centrifuga

b) Materiales

 Láminas porta objetos

 Láminas cubre objetos

 Gradilla

 Pipetas Pasteur.

 Tubos de ensayo

 Embudo

 Gasa

 Aplicadores de madera

c) Reactivos

 Solución salina isotónica

 Lugol

 Muestra de heces

IV. PROCEDIMIENTO

Examen Macroscópico de Heces

Observar las características de las heces como:

 Olor

 Color

 Consistencia (Líquida, Sólida, Semisólida, Pastosa).

 Aspecto (presencia de mucus, sangre).

Examen Microscópico de Heces

Realizar el Examen Directo

a) En un portaobjetos limpio, se colocan separadamente, una gota de solución fisiológica y otra de lugol.

b) Con el aplicador de madera se toma una muestra de 1 a 2 mg de heces y se mezcla con la solución, con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos, procurando hacer una suspensión no un frotis.

c) Colocar el cubreobjetos.

d) Repetir estas operaciones en la gota de lugol.

e) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X.

Realizar el Examen Concentrado

Método de Faust. Concentración por Flotación: (Huevos, larvas y quistes)

a) Preparar una solución de Sulfato de Zinc (33%).

b) Se hace una suspensión homogénea con 2 g de materia fecal y 10 ml de agua.

c) Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, colectando el filtrado directamente en el tubo.

d) Se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 3 min.

e) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua. Se centrífuga nuevamente, repitiendo la misma operación hasta que el sobrenadante se observe limpio.

f) Se decanta el último sobrenadante, se resuspende el sedimento y se agrega Sulfato de Zinc al 33%y se centrífuga a 2000 rpm durante 3min.

g) Con el asa se recoge la muestra de la película superficial que se encuentra en el menisco, dos o tres ocasiones y se deposita sobre el portaobjetos; se añade una gota de lugol, se mezcla con el ángulo del cubreobjetos y se cubre con el mismo.

h) Se observa la preparación con objetivos de 10 X y 40 X

Método de Graham (Raspado Perianal)

a) Sobre un extremo del bajalenguas se coloca la cinta Scotch con la parte adherente hacia fuera, sujetándola con los dedos pulgar e índice.

b) Se presiona la superficie sobre la región perianal hacia uno y otro lado, finalmente se hace un frote perianal.

c) Separar cuidadosamente la cinta del bajalenguas y adherirlo sobre un portaobjetos.

d) Observar con objetivo de 10X.

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