Inmunoelectroforesis de suero humano

Jair Hernández Medina

25/03/2015

Inmunobiología

Práctica 5. Inmunoelectroforesis de suero humano

Introducción

La inmunoelectroforesis combina la electroforesis con técnicas inmunoquímicas. Se desarrolla en dos partes: primero se separan por electroforesis los antígenos de un espécimen y después éstos difunden en presencia de un suero con anticuerpos contra dichos antígenos. El medio de soporte más adecuado para realizar la inmunoelectroforesis es el gel de agarosa. La inmunoelectroforesis permite distinguir entre las alteraciones de una molécula debidas a cambios estructurales y alteraciones debidas a modificaciones de su carga eléctrica neta. Si las características electroforéticas de una molécula en condiciones patológicas son distintas de las que tiene en condiciones fisiológicas, ello indica que existe una alteración en su carga eléctrica; pero si las diferencias solo se ponen de manifiesto en los resultados de la inmunodifusión (líneas de precipitación), indica que existe alteración estructural (Fuentes, 1998).

CONTRAINMUNOELECTROFORESIS

Consiste en añadir los antígenos en una zona del medio de soporte y los anticuerpos contra dichos antígenos en la zona opuesta, de forma que al aplicar el campo eléctrico, los antígenos migren hacia donde están los anticuerpos y estos a su vez hacia donde están los antígenos, hasta que se produzca la reacción antígeno-anticuerpo, formando complejos que originan líneas visibles de precipitación (Fuentes, 1998).

INMUNOELECTROFORESIS CRUZADA

Primero se separan los antígenos del espécimen por electroforesis en una dirección. Después se corta el gel, con los antígenos ya separados, y se coloca en un medio de soporte que contenga una mezcla de anticuerpos contra dichos antígenos. Luego se realiza la segunda electroforesis en la dirección que forme un ángulo recto con la primera. Cuando se produce la reacción antígeno-anticuerpo, los complejos que se forman precipitan y aparecen una líneas de precipitación en forma de arco. Esta técnica tiene una resolución mayor que la inmunoelectroforesis y, al igual que en ésta, el medio de soporte que se utiliza es el gel de agarosa (se puede mejorar la resolución si en la 1ª electroforesis se sustituye el gel de agarosa por gel de poliacrilamida). Los resultados se pueden interpretar desde un punto de vista cualitativo o cuantitativo (el área del arco de precipitación es directamente proporcional a la concentración del constituyente) (Fuentes, 1998).

Objetivo

• Realizar una Inmunoelectroforesis separando por carga y por peso las proteínas del suero y evidenciándolas por precipitación con anticuerpos una vez terminada la corrida.

Material

- Agarosa 0.7%

- Agua destilada

- Matraz

- Mechero

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