La Membrana

Observación de la hemolisis

En un tubo de ensayo se pusieron 6 mL de solución salina (NaCl 0.15 M), mas seis gotas de sangre, después de mezclar con suavidad se tendrá una suspensión de glóbulos rojos que se conservara durante toda la práctica.

De la suspensión anterior se tomaron las cantidades necesarias para las pruebas siguientes.

Se aprenderá a distinguir el fenómeno de hemolisis. Se agregó 5 gotas de la suspensión inicial de glóbulos rojos a dos tubos de ensayo, uno de ellos se colocó 5 mL de agua destilada y al otro 5 mL de solución salina.

Se observó a través del líquido de los tubos y se determinó en cual se ha producido la hemolisis.

Actividad Osmótica de sustancias no difusibles

La permeabilidad de la membrana de los glóbulos rojos es mucho mayor para el agua que para los iones, dependiendo de la concentración de la solución en la que se coloquen los glóbulos rojos ocurrirá o no la osmosis. Se determinara la os molaridad necesaria para que se produzca la hemolisis. Para ellos a partir de soluciones de NaCl 0.15 M, CaCl2 0.15 M y sacarosa 0.15 M , se prepararan la diluciones indicadas en la tabla 1, en cada una de ellas agregar 5 gotas de la suspensión inicial de glóbulos rojos; mezclar con suavidad al hacer las diluciones y al añadir las 5 gotas.

El tiempo transcurrido para la rotura de los glóbulos rojos (hemolisis) se tomara como medida de la permeabilidad frente a las distintas disoluciones. Realizar las observaciones cada minuto durante los primeros cinco minutos, después cada cinco minutos hasta el final de la práctica.

Actividad osmótica de sustancias difusibles

Algunas sustancias pueden difundir a través de las membranas sin dificultad. Estas sustancias tienden a equilibrarse a ambos lados de la membrana y normalmente arrastran agua, ya que otros solutos osmóticamente activos no pueden salir para compensar la entrada, se produce un gradiente osmótico hacia el interior de la célula.

Para poner de manifiesto este efecto se utilizaran soluciones isoosmóticas con respecto al contenido de los glóbulos rojos (0.3 osmolar) de una sustancia difusible (glicerol) y de otra no difusible (sacarosa).

Colocar 5 mL de cada una de las soluciones (glicerol 0.3 M y sacarosa 0.3 M) en diferentes tubos de ensayo y añada a cada uno de ellos 5 gotas de la suspensión de glóbulos rojos, mezcle suavemente y observe el efecto producido.

Velocidad de difusión

Como se ha mencionado, existen diversas sustancias que pueden atravesar la membrana celular, pero la velocidad a la que difunden depende de su solubilidad en la matriz lipídica de la membrana. Un índice que se usa con frecuencia en estudios de este tipo es el coeficiente de partición, que se define como la relación que resultad de comparar la solubilidad de una sustancia en aceite, con respecto a su solubilidad en agua. Dicho coeficiente s mayor entre mayor sea el peso molecular y la longitud de la cadena de átomos de carbono de la sustancia.

Para este experimento se utilizaran soluciones isoosmoticas (0.3 M) de sustancias con diferentes coeficientes de partición:

• Alcohol metílico (CH3OH) Coeficiente de partición = 0.0097

• Alcohol etílico (CH3-CH2OH) Coeficiente de partición = 0.0357

• Alcohol propílico ( CH3-CH2-CH2-OH) Coeficiente de partición = 0.156

Colocar 5 mL de cada solución en tubos de ensayo previamente etiquetados y añadir a cada uno 5 gotas de la suspensión de glóbulos rojos. Mezclar y observar rápidamente los efectos, medir el tiempo (en segundos) en que se produce la hemolisis total. Hacer una comparación con la hemolisis producida en agua destilada.

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