Maquinaria para desgranar elotes
Enviado por Jorkyon • 12 de Agosto de 2019 • Trabajos • 684 Palabras (3 Páginas) • 399 Visitas
Número Más Probable (NMP)
Materiales
- 45 tubos de ensayo con taparrosca (15 para prueba presuntiva y 30 para prueba confirmativa)
- Micropipeta
- 9 puntas desechables de plástico para micropipeta (3 para prueba presuntiva y 3 para prueba confirmativa)
- 4 matraz Erlenmeyer de 250 ml o 300 ml.
- Asa microbiológica
- 45 tubos Durham (15 para prueba presuntiva y 30 para prueba confirmativa)
- Espátula
- Algodón
- Papel extrasa
- Cubrebocas
- Cofia
- Guantes
- Plumón o etiquetas
- Probeta
- Mechero bunsen
- Tripie
- Tela de asbesto
Equipo
- Autoclave
- Incubadora
- Balanza
- Campana de flujo laminar
Medios de cultivo
- Caldo lactosado
Suspender 13 g en un litro de agua destilada, dejar reposar por 5 minutos. Calentar con agitación constante y llevar a ebullición para disolución total. Distribuir en los tubos de ensayo con campana de Durham invertidos. Esterilizar con autoclave a 121°C durante 15 minutos.
(En este caso se necesitarán 140 ml de caldo lactosado a concentración simple. Se disolverán 1.82 g de caldo lactosado en 140 ml de agua destilada. Para la concentración doble se disolverán 2.08 g de caldo lactosado en 80 ml de agua destilada).
- Caldo lactosado-bilis-verde brillante
Disolver 40 g en un litro de agua destilada, calentar con agitación constante y llevar a ebullición para disolución total. Distribuir en los tubos de ensayo con campana de Durham invertidos. Esterilizar con autoclave a 121°C durante 15 minutos.
(En este caso se necesitarán 180 ml de caldo lactosado-bilis-verde brillante. Se disolverán 7.2 g de caldo LBVB en 180 ml de agua destilada).
- Caldo EC
Disolver 37 g en un litro de agua destilada, calentar con agitación constante y llevar a ebullición para disolución total. Distribuir en los tubos de ensayo con campana de Durham invertidos. Esterilizar con autoclave a 121°C durante 15 minutos.
(En este caso se necesitarán 180 ml de caldo EC. Se disolverán 6.6 g de caldo EC en 180 ml de agua destilada).
Procedimiento
1. Mezclar perfectamente la muestra agitándola vigorosamente para lograr una distribución uniforme de los microorganismos. Utilizar series de tres diluciones: 10 ml, 1.0 ml y 0.1 ml. Por cada dilución habrá 5 tubos. Se colocarán 10 ml de la muestra en los de doble concentración en los 5 tubos con campana de Durham invertidos, 1 ml y 0.1 ml de muestra en los tubos con concentración simple con campana de Durham invertidos correspondientes.
2. Incubar los tubos inoculados a 35-37°C durante 24-48horas.
3. Examinar los cultivos de los tubos después de un período de incubación de 18 a 24 horas y considerar como resultados positivos aquellos que muestren turbidez debido al crecimiento bacteriano y formación de gas en los tubos internos invertidos (Durham). Reincubar aquellos tubos que no muestran alguno o todos estos cambios y examinarlos nuevamente para detectar reacciones positivas a las 48 horas.
4. Resembrar a partir de cada tubo de medio de aislamiento que muestre un resultado positivo en uno o más tubos en caldo lactosado-bilis-verde brillante durante 24-48 horas a 35-37°C y en caldo EC durante 24-48 horas a 44.5°C para detectar la producción de gas e indol.
5. Examinar los cultivos de los tubos después del período de incubación y considerar como resultados positivos aquellos que muestren turbidez debido al crecimiento bacteriano y formación de gas en los tubos internos invertidos (Durham).
6. A partir del número de tubos que dan reacciones positivas en los medios de aislamiento y confirmativo, calcular de acuerdo a las tablas estadísticas (ver Tabla 1) el número más probable de organismos coliformes, termotolerantes y E. coli presuntiva en 100 ml de la muestra. Cuando se emplean diluciones, el resultado final deberá multiplicarse por el factor de dilución para hacerlo equivalente. El resultado final se expresará en NMP/100 ml.
En la Figura 1 y 2 se muestran el diagrama del proceso para la realización de la técnica del NMP para prueba presuntiva y confirmativa respectivamente.
Tabla 1. NMP para 100mL de muestra cuando se usan 5 porciones en cada una de tres diluciones con series geométricas.
No. de Tubos positivos | No. de Tubos positivos | No. de Tubos positivos | No. de Tubos positivos | No. de Tubos positivos | No. de Tubos positivos | ||||||||||||||||||
10 mL | 1 mL | 0.1 mL | NMP | 10 mL | 1 mL | 0.1 mL | NMP | 10 mL | 1 mL | 0.1 mL | NMP | 10 mL | 1 mL | 0.1 mL | NMP | 10 mL | 1 mL | 0.1 mL | NMP | 10 mL | 1 mL | 0.1 mL | NMP |
0 | 0 | 0 | <1.8 | 1 | 0 | 0 | 2.0 | 2 | 0 | 0 | 4.5 | 3 | 0 | 0 | 7.8 | 4 | 0 | 0 | 13 | 5 | 0 | 0 | 23 |
0 | 0 | 1 | 1.8 | 1 | 0 | 1 | 4.0 | 2 | 0 | 1 | 6.8 | 3 | 0 | 1 | 11 | 4 | 0 | 1 | 17 | 5 | 0 | 1 | 31 |
0 | 0 | 2 | 3.6 | 1 | 0 | 2 | 6.0 | 2 | 0 | 2 | 9.1 | 3 | 0 | 2 | 13 | 4 | 0 | 2 | 21 | 5 | 0 | 2 | 43 |
0 | 0 | 3 | 5.4 | 1 | 0 | 3 | 8.0 | 2 | 0 | 3 | 12 | 3 | 0 | 3 | 16 | 4 | 0 | 3 | 25 | 5 | 0 | 3 | 58 |
0 | 0 | 4 | 7.2 | 1 | 0 | 4 | 10 | 2 | 0 | 4 | 14 | 3 | 0 | 4 | 20 | 4 | 0 | 4 | 30 | 5 | 0 | 4 | 76 |
0 | 0 | 5 | 9.0 | 1 | 0 | 5 | 12 | 2 | 0 | 5 | 16 | 3 | 0 | 5 | 23 | 4 | 0 | 5 | 36 | 5 | 0 | 5 | 95 |
0 | 1 | 0 | 1.8 | 1 | 1 | 0 | 4.0 | 2 | 1 | 0 | 6.8 | 3 | 1 | 0 | 11 | 4 | 1 | 0 | 17 | 5 | 1 | 0 | 33 |
0 | 1 | 1 | 3.6 | 1 | 1 | 1 | 6.1 | 2 | 1 | 1 | 9.2 | 3 | 1 | 1 | 14 | 4 | 1 | 1 | 21 | 5 | 1 | 1 | 46 |
0 | 1 | 2 | 5.5 | 1 | 1 | 2 | 8.1 | 2 | 1 | 2 | 12 | 3 | 1 | 2 | 17 | 4 | 1 | 2 | 26 | 5 | 1 | 2 | 63 |
0 | 1 | 3 | 7.3 | 1 | 1 | 3 | 10 | 2 | 1 | 3 | 14 | 3 | 1 | 3 | 20 | 4 | 1 | 3 | 31 | 5 | 1 | 3 | 84 |
0 | 1 | 4 | 9.1 | 1 | 1 | 4 | 12 | 2 | 1 | 4 | 17 | 3 | 1 | 4 | 23 | 4 | 1 | 4 | 36 | 5 | 1 | 4 | 110 |
0 | 1 | 5 | 11 | 1 | 1 | 5 | 14 | 2 | 1 | 5 | 19 | 3 | 1 | 5 | 27 | 4 | 1 | 5 | 42 | 5 | 1 | 5 | 130 |
0 | 2 | 0 | 3.7 | 1 | 2 | 0 | 6.1 | 2 | 2 | 0 | 9.3 | 3 | 2 | 0 | 14 | 4 | 2 | 0 | 22 | 5 | 2 | 0 | 49 |
0 | 2 | 1 | 5.5 | 1 | 2 | 1 | 8.2 | 2 | 2 | 1 | 12 | 3 | 2 | 1 | 17 | 4 | 2 | 1 | 26 | 5 | 2 | 1 | 70 |
0 | 2 | 2 | 7.4 | 1 | 2 | 2 | 10 | 2 | 2 | 2 | 14 | 3 | 2 | 2 | 20 | 4 | 2 | 2 | 32 | 5 | 2 | 2 | 94 |
0 | 2 | 3 | 9.2 | 1 | 2 | 3 | 12 | 2 | 2 | 3 | 17 | 3 | 2 | 3 | 24 | 4 | 2 | 3 | 38 | 5 | 2 | 3 | 120 |
0 | 2 | 4 | 11 | 1 | 2 | 4 | 15 | 2 | 2 | 4 | 19 | 3 | 2 | 4 | 27 | 4 | 2 | 4 | 44 | 5 | 2 | 4 | 150 |
0 | 2 | 5 | 13 | 1 | 2 | 5 | 17 | 2 | 2 | 5 | 22 | 3 | 2 | 5 | 31 | 4 | 2 | 5 | 50 | 5 | 2 | 5 | 180 |
0 | 3 | 0 | 5.6 | 1 | 3 | 0 | 8.3 | 2 | 3 | 0 | 12 | 3 | 3 | 0 | 17 | 4 | 3 | 0 | 27 | 5 | 3 | 0 | 79 |
0 | 3 | 1 | 7.4 | 1 | 3 | 1 | 10 | 2 | 3 | 1 | 14 | 3 | 3 | 1 | 21 | 4 | 3 | 1 | 33 | 5 | 3 | 1 | 110 |
0 | 3 | 2 | 9.3 | 1 | 3 | 2 | 13 | 2 | 3 | 2 | 17 | 3 | 3 | 2 | 24 | 4 | 3 | 2 | 39 | 5 | 3 | 2 | 140 |
0 | 3 | 3 | 11 | 1 | 3 | 3 | 15 | 2 | 3 | 3 | 20 | 3 | 3 | 3 | 28 | 4 | 3 | 3 | 45 | 5 | 3 | 3 | 180 |
0 | 3 | 4 | 13 | 1 | 3 | 4 | 17 | 2 | 3 | 4 | 22 | 3 | 3 | 4 | 31 | 4 | 3 | 4 | 52 | 5 | 3 | 4 | 210 |
0 | 3 | 5 | 15 | 1 | 3 | 5 | 19 | 2 | 3 | 5 | 25 | 3 | 3 | 5 | 35 | 4 | 3 | 5 | 59 | 5 | 3 | 5 | 250 |
0 | 4 | 0 | 7.5 | 1 | 4 | 0 | 11 | 2 | 4 | 0 | 15 | 3 | 4 | 0 | 21 | 4 | 4 | 0 | 34 | 5 | 4 | 0 | 130 |
0 | 4 | 1 | 9.4 | 1 | 4 | 1 | 13 | 2 | 4 | 1 | 17 | 3 | 4 | 1 | 24 | 4 | 4 | 1 | 40 | 5 | 4 | 1 | 170 |
0 | 4 | 2 | 11 | 1 | 4 | 2 | 15 | 2 | 4 | 2 | 20 | 3 | 4 | 2 | 28 | 4 | 4 | 2 | 47 | 5 | 4 | 2 | 220 |
0 | 4 | 3 | 13 | 1 | 4 | 3 | 17 | 2 | 4 | 3 | 23 | 3 | 4 | 3 | 32 | 4 | 4 | 3 | 54 | 5 | 4 | 3 | 280 |
0 | 4 | 4 | 15 | 1 | 4 | 4 | 19 | 2 | 4 | 4 | 25 | 3 | 4 | 4 | 36 | 4 | 4 | 4 | 62 | 5 | 4 | 4 | 350 |
0 | 4 | 5 | 17 | 1 | 4 | 5 | 22 | 2 | 4 | 5 | 28 | 3 | 4 | 5 | 40 | 4 | 4 | 5 | 69 | 5 | 4 | 5 | 430 |
0 | 5 | 0 | 9.4 | 1 | 5 | 0 | 13 | 2 | 5 | 0 | 17 | 3 | 5 | 0 | 25 | 4 | 5 | 0 | 41 | 5 | 5 | 0 | 240 |
0 | 5 | 1 | 11 | 1 | 5 | 1 | 15 | 2 | 5 | 1 | 20 | 3 | 5 | 1 | 29 | 4 | 5 | 1 | 48 | 5 | 5 | 1 | 350 |
0 | 5 | 2 | 13 | 1 | 5 | 2 | 17 | 2 | 5 | 2 | 23 | 3 | 5 | 2 | 32 | 4 | 5 | 2 | 56 | 5 | 5 | 2 | 540 |
0 | 5 | 3 | 15 | 1 | 5 | 3 | 19 | 2 | 5 | 3 | 26 | 3 | 5 | 3 | 37 | 4 | 5 | 3 | 64 | 5 | 5 | 3 | 920 |
0 | 5 | 4 | 17 | 1 | 5 | 4 | 22 | 2 | 5 | 4 | 29 | 3 | 5 | 4 | 41 | 4 | 5 | 4 | 72 | 5 | 5 | 4 | 1600 |
0 | 5 | 5 | 19 | 1 | 5 | 5 | 24 | 2 | 5 | 5 | 32 | 3 | 5 | 5 | 45 | 4 | 5 | 5 | 81 | 5 | 5 | 5 | >1600 |
Referencia: Official Methods of Analysis of AOAC International, 18 ed. 2005. Chapter 17.3. |
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