Microscopio confocal
Enviado por paucmedina • 1 de Diciembre de 2022 • Ensayos • 1.056 Palabras (5 Páginas) • 42 Visitas
Introducción.
- Es un microscopio que permite obtener imágenes de un único plano confocal. El principio en el que se basa el microscopio confocal es eliminar la luz procedente de los planos fuera del foco. El microscopio confocal trabaja con epiluminación, es decir, con muestras que reflejan la luz o emiten fluorescencia.
El concepto de imagen confocal fue patentado por Marvin Minsky en 1957. En un microscopio de fluorescencia convencional (p.ej., de campo amplio), el espécimen entero está sobresaturado de luz a partir de la fuente de iluminación. Debido a la conservación de la intensidad de la luz en su recorrido, todas las partes del espécimen a lo largo de su ruta óptica serán excitadas y la fluorescencia detectada por un fotodetector o una cámara. Por el contrario, un microscopio confocal utiliza iluminación puntual y un "pinhole" en un plano óptico conjugado en frente del detector para eliminar la información que está fuera del plano focal. Sólo la luz que está dentro de este plano puede ser detectada, de modo que la calidad de imagen es mucho mejor que las de campo amplio. Puesto que sólo se ilumina un punto cada vez en el microscopio confocal, se requiere una exploración (scanning) sobre un raster regular en el espécimen para obtener imágenes bi o tridimensionales. La delgadez del plano focal se define mayormente como el cuadrado de la apertura numérica de la lente del objetivo y también por las propiedades ópticas del espécimen y el índice de refracción del ambiente.
Desarrollo.
- Se desarrollan el concepto de la microscopia confocal a partir de las limitaciones de los microscopios ópticos para investigaciones biológicas ya que con un microscopio convencional no se distinguen todas las estructuras complejas de las células vivas. Al realizar cortes de este tipo de muestras se vuelven completamente inútiles.
La microscopia confocal se basa en la utilización de fuentes de iluminación y detectores de luz y otros elementos que impiden la luminiscencia procedente de planos diferentes al del foco de la muestra.
Los microscopios confocales captan la luz de todos los planos, pero no toda llega hasta el ojo del investigador. La luz emitida por los planos que está fuera de foco al momento de estudiar la muestra, impide la visualización de la misma manera específica. Esta luz se elimina con la incorporación <<pinhole>> o diafragma dentro del microscopio
Los objetos tridimensionales tienen varios planos focales y la luz de todos sus planos es refractada por la lente. Pero, solo la que esta en el plano central pasa a través del pinhole, permitiendo una imagen nítida y sin interferencia del espécimen.
Los microscopios confocal modernos están complementados con sistemas informáticos que permiten realizar reconstrucción tridimensional. Dicha reconstrucción en distintas secciones ópticas se asemeja a los cortes de un sistema radiológico de TAC o resonancia magnética. A partir de allí se apertura nuevos campos de investigación centrados en la reconstrucción informáticamente de estructuras anatómicas humanas
Partes del microscopio confocal.
Los microscopios confocales simples tienen un diseño básico que permiten formar una imagen a través de un proceso de barrido punto a punto de la muestra. Dicho proceso genera imágenes con mayor resolución.
El microscopio confocal se compone de:
- Fuente luminosa: Es la encargada de captar la luz por emisión estimulada de radicación.
- Espejo dicroico: Refleja totalmente la luz que incide con un ángulo de cerca de 45°.
- Ranura detectora “Pinhole”: Permite el paso de la luz reflejada por el plano focal
- Lente objetivo: Enfoca los rayos de luz que se reflejan en el espejo dicroico hacia el plano focal en las distintas secciones ópticas
- Detector: Recibe el haz de luz y corrige las distorsiones para generar una imagen.
EQUIPAMIENTO
- Microscopio confocal SENSOFAR de tipo PL m NIKON modelo ECLIPSE ME600.
Dispone de plataforma móvil en tres ejes en el que se pueden ensayar piezas de tamaño aproximadamente 110 x 70 x 27 mm.
Disponemos de tres ópticas, dos de tipo EPI de 20 y 100 aumentos y otra de tipo SLWD de 50 aumentos.
El software utilizado es PLm Confocal Imaging Profiler.
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