Métodos para la cuantificación de proteínas
Enviado por erikerik • 1 de Julio de 2013 • Informes • 240 Palabras (1 Páginas) • 498 Visitas
Para el estudio de la estructurar de una proteína, de la actividad de una enzima o el contenido proteico de un alimento, es necesario conocer cuantitativamente la concentración de las proteínas (Fernandez, 2008).
Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en:
a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV,
b) para la formación de derivados químicos, o
c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.
El método usado en esta práctica fue Bradford y se fundamenta en la fijación del colorante Azul de Coomassie (Fast Blue B) a las proteínas, dando lugar a un cambio en el color que puede ser medido en un espectrofotómetro. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. El método es extremadamente sensible, detectando cantidades de 1 ug o incluso inferiores. Un inconveniente que muestra el método es la interferencia con detergentes y las soluciones básicas (Battaner. 2012).
El ensayo de Bradford es un ensayo colorimético para la medición de proteína total en una solución dada.
Involucra la unión de un colorante el Coomassie ® Brilliant Blue a las proteínas en un medio ácido y su conmitante cambio de absorbancia de 465 a 595 nm.
Debido a que el reactivo causa la precipitación de la proteína con el
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