PRÁCTICA DE LABORATORIO PCR
Enviado por andresperezj17 • 20 de Mayo de 2014 • 303 Palabras (2 Páginas) • 592 Visitas
UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS
PRÁCTICA DE LABORATORIO
PCR
Objetivo:
Amplificar el material genético de una muestra de AND de bovino empleando la técnica de reacción en cadena de la polimerasa PCR
Materiales:
Tubos de PCR 0,2 ml
Micropipetas
1 Gradilla para PCR
Servilletas
Alcohol
Reactivos:
Nucleotidos (adenina, citocina, guanina, timina),
Primer sentido y antisentido
Taq AND polimerasa
H2O bidestilada
ADN extraido
Equipo
Termociclador
Metodología
1. Limpie el área de trabajo con una servilleta impregnada con alcohol
2. Coloque cada uno de los materiales e implementos sobre una servilleta limpia
3. Descongele cada uno de los reactivos utilizados en la reacción
4. Ubique un tubo de reacción de 0,2 ml y márquelo en la tapa con las iniciales de su nombre
5. Utilice los siguientes volúmenes para ubicarlos dentro del tubo de 0,2 ml a partir del siguiente protocolo
Reactivo Volume por muestra
Nucleotidos (adenina, citocina, guanina, timina) 2 µl de cada uno
Primer sentido y antisentido 2 µl de cada uno
Taq ADN polimerasa 2ul
H20 3 µl
ADN (0,5 – 5 ng/µl) 3 µl
6. En el termociclador utilice el siguiente protocolo de amplificación
30 CICLOS 4 ºC
DENATURACION ANILLAMIENTO EXTENSION
96 ºC
10 segundos 55 ºC
5 segundos 60
...