Sala De Embriologia

Resumen:

En este trabajo se procuró extraer caseína de leche descremada, llevándola a su punto isoeléctrico con un pH=4.8, para que ésta precipitase. Centrifugando el precipitado y eliminando el sobrenadante para aislar a dicha proteína.

La caseína extraída fue escasa, debido posiblemente a la utilización de agua normal, en lugar de agua destilada.

Con ayuda de otra cantidad de caseína proporcionada y preparada con anterioridad, se llevó acabo la cuantificación de dicha proteína.

Introducción:

Por lo general las proteínas contienen numerosos grupos ionizables con distintos valores de pK. A un pH característico para cada proteína, las cargas positivas de la molécula equilibran con exactitud sus cargas negativas. A ese pH, denominado punto isoeléctrico de la proteína, la molécula proteica no tiene carga neta y por lo tanto es inmóvil en un campo eléctrico.

A medida que el pH varía a partir del punto isoeléctrico de la proteína, esto es, a medida que aumenta su carga neta, la proteína debería verse cada vez más influida por el fenómeno de salting in, ya que se incrementan las interacciones electrostáticas entre moléculas vecinas que promueven la agregación y la precipitación. Por lo tanto, en soluciones de concentración salina moderada se espera que la solubilidad de una proteína como función del pH sea mínima en el punto isoeléctrico de la proteína y que se incremente alrededor de ese punto con respecto al pH.

Las proteínas varían en su composición aminoacídica, por lo tanto, sus puntos isoeléctricos serán diferentes entre una y otra proteína. Este fenómeno es la base de un procedimiento de purificación proteica llamado precipitación isoeléctrica, en el que el pH de una mezcla proteica se ajusta hasta el punto isoeléctrico de la proteína que se quiere aislar, de manera para minimizar en forma selectiva su solubilidad (Voet, et al; 2006).

La caseína es una de las fosfoproteínas de la leche que se precipita a pH de 4.8. Esta propiedad se puede explotar para purificarla simplemente al acidificar el medio (Rodarte, et al; 2012).

En general, para la cuantificación de proteínas se pueden emplear numerosos métodos. Entre los distintos métodos podemos citar los siguientes:

Métodos espectrométricos; las proteínas muestran su máximo de absorción a 280 nm debido a la presencia de residuos de aminoácidos aromáticos. También se puede utilizar la longitud de onda de 220 nm que es propia de los enlaces peptídicos.

Métodos químicos; como el método Kjeldahl, mediante el cual se determina el contenido de nitrógeno de un compuesto. Para obtener resultados óptimos es necesario realizar un paso de precipitación de las proteínas para así eliminar las interferencias que producen otros compuestos orgánicos que poseen nitrógeno. Otro método químico es el de Biuret, que se basa en la reacción de las proteínas con una disolución de sulfato de cobre, mediante el cual se forma un compuesto coloreado que absorbe la radiación a una determinada longitud de onda (Santiago; 2006).

La cuantificación de proteínas con el reactivo de Biuret se lleva a cabo al formar un complejo colorido que tiene un máximo de absorción a 540 nm.

La cuantificación de proteínas usando el reactivo de Biuret es un método muy utilizado por ser sencillo, rápido y económico. El reactivo de Biuret es una solución alcalina de cobre que forma un complejo de color azul púrpura con los enlaces peptídicos de las proteínas (Rodarte; 2012).

Por último, se puede utilizar el método Lorry, en el que se emplea el reactivo de Folin y Ciocalteu, el cual detecta residuos de tirosina debido a su naturaleza fenólica. Para incrementar la sensibilidad del método se le añade a dicho reactivo iones cuprosos, produciéndose entonces la unión proteína-cobre que absorbe em la región

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