Tp-estructuras

Recuperatorio 1° parcial

NOMBRE:  …………………………………………….

Pregunta 1:

Para cada una de las siguientes enzimas utilizadas en clonados moleculares:

a- Pfu DNA polimerasa

b- T4 ADN Ligasa

c- Fosfatasa alcalina bacteriana (E. coli)

Especifique:

i) Actividad enzimática

ii) Requerimientos específicos cuando corresponda

iii) Al menos una posible aplicación

Pregunta 2:

En el laboratorio usted logró clonar la enzima Multipol. Esta enzima posee dominios de Pfu con actividad polimerasa 5`->3` y exonucleasa 3`->5` y un dominio de Taq que le confiere actividad transferasa terminal.

A partir de éstos datos indique las características del plásmido utilizado (promotor, etiquetas, etc) para expresar el gen que codifica para la Multipol en Escherichia coli y obtener la proteína de interés con un alto grado de pureza.

Evaluar la calidad de la enzima purificada en función de los resultados obtenidos en el gel de agarosa y responder:

¿Está contento con todos los resultados obtenidos en su gel? Justifique su respuesta.

¿Qué volumen de enzima Multipol utilizará para futuras reacciones?

¿Qué tiempo de elongación utilizó en el programa de PCR?

M (pb): Marcador de peso molecular en pares de bases.

0,2; 0,5; 1 y 2: microlitros de enzima utilizados en cada reacción de PCR.

C +: control positivo.

C -: control negativo.

Pregunta 3:

Usted está caracterizando el transcripto del gen Sox9 en Gallus gallus (pollo). Según la homología con otras especies el gen presenta 8 exones, y el primer ATG se encuentra en el exón 2. Para completar la caracterización del transcripto necesita amplificar los UTRs.

...