Técnicas de asepsia para el ambiente de trabajo

PARTE EXPERIMENTAL:

5.1 Técnicas de asepsia para el ambiente de trabajo

5.1.1. Mechero Bunsem

[pic 1]

Microorganismos presentes en el ambiente antes de encender el mechero

[pic 2]

Trabajar con un mechero encendido hace que el aire se caliente, lo cual genera corrientes ascendentes que arrastran los microorganismos y no los dejan caer en la superficie donde se encuentra el material de trabajo.

5.1.2 Campana de flujo laminar

[pic 3]

Microorganismos presentes alrededor antes de encenderla la campana de flujo laminar

[pic 4]

La campana de flujo laminar posee un filtro por el cual se genera aire a alta presión el mismo que expulsa los microrganismos al exterior, permitiendo así un trabajo libre de contaminación.

5.2 Técnicas básicas de trabajo en el laboratorio de microbiología

5.2.1 Siembra en medio sólido

1. Siembra por zonas

-Se inicia esterilizando el asa de siembra en el mechero de bunsen

-con la punta del asa de siembra se toca la muestra que será inoculada y se pasa en zigzag por la zona de descarga de la placa donde se va a cultivar, Se realiza este procedimiento 2 veces más, a modo de diluir los microorganismos.

-Colocar las placas boca abajo en la incubadora por el tiempo necesario, luego observar

[pic 5]

1. Siembra en césped

• Se inicia esterilizando el asa de siembra en el mechero de bunsen
• Con la punta del asa de la siembra se toca la muestra que será incolulada
• El microorganismo al inocular se encuentra diluido y se añade en la placa
• Se coloca las bolitas de vidrio estériles y se agita en forma horizontal y se retiran cuando se ha secado al medio liquido
• Colocar las placas boca abajo en la incubadora por un tiempo necesario, luego observar

[pic 6]

5.2.2 Inoculación en medío líquido

Se utiliza para obtener una gran cantidad de células de un microorganismo estos cultivos se hallarán en suspensión en medio líquido.

1. Desde colonia

• Esterilizar el asa de siembra sometiéndola al calor de mechero
• Tocar una colonia con el asa de siembra
• Destapar el tubo con el medio líquido, flamear rápidamente en el mechero e introducir el asa de siembra con el cultivo
• Finalmente esterilizar el asa de siembra

1. Desde medio líquido

• Destapar el tubo que contiene el cultivo, flamear rápidamente en el mechero y con ayuda de la micropipeta sacamos el volumen deseado.
• Inocular en el tubo, previamente flameado, que contiene el medio liquido estéril
• Finalmente rotular los tubos y llevar a la incubadora con agitación

5.3 Preparación de diluciones

[pic 7]

5.4 Conteo de bacterias (Escherichia coli)

Primero diluiremos 25gr de la muestra de queso fresco y lo diluimos en 100ml de agua peptonada.

Realizaremos diluciones seriadas hasta un factor de dilución de 103

Según la “Norma sanitaria que establece los criterios microbiológicos de calidad sanitaria e inocuidad para alimentos y bebidas de consumo humano” RM 591:2008/MINSA, tenemos que en “Queso no madurados (Queso fresco, mantecoso rícotta, cabaña, crema, petit suisse, mozarella, ucayalino, otros)” los microorganismos que pueden encontrarse y afecten la salud son coliformes, staphylococcus aureus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Salmonella Sp.

[pic 8]

Analizando presencia de Escherichia coli

Se añadira 1ml de la muestra sin diluir A en un Agar Endo y 1ml de la muestra B en otra placa con Agar Endo. Extendemos la muestra con bolitas de vidrio estériles. Una vez sembradas, se hará el cultivo para que puedan crecer las bacterias y formar colonias.

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