Viabilidad de gametos

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO [pic 1][pic 2]

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

MATERIA: LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN FORMATIVA III

“VARIABILIDAD DE GAMETOS”

INTRODUCCION

Una vez descrita la meiosis, es posible estudiar y comparar los procesos específicos de la espermatogénesis y la oogénesis. En la pubertad. los testículos comienzan a secretar mucha más cantidad de la hormona esteroidea testosterona, cuyos efectos son múltiples. Además de estimular el desarrollo de muchos caracteres  sexuales secundarios, desencadena el crecimiento de los testículos, la maduración de los túbulos seminíferos y el comienzo de la espermatogénesis.

Bajo el estimulo de la testosterona, las células de Sertoli se diferencian en un sistema de túbulos seminíferos. Las células germinales primordiales en reposo reanudan su desarrollo, se dividen varias veces por mitosis y acaban diferenciándose a espermatogonias.

Estas espermatogonias se localizan inmediatamente por debajo de la membrana basal que rodea a los túbulos seminíferos, donde ocupan huecos entre las células de Sertoli. Cada espermatogonia está conectada a las células de Sertoli adyacentes mediante uniones de membranas  especializadas. Además, todas las células de Sertoli se mantienen unidas entre sí gracias a densas bandas de uniones de membrana que rodean por completo a cada célula de Sertoli y de esta forma aíslan a las espermatogonias atrapadas de la luz del túbulo.

Las células que van a experimentar la espermatogenesis proceden de las espermatogonias por mitosis. A medida que la espermatogenesis progresa, estas células se trasladan gradualmente desde el lado basal al luminal del epitelio seminífero, pasando entre las células de Sertolí.

Durante la fase migratoria, los espermatocitos primarios reclutados experimentan sin interrupción las dos divisiones meióticas, produciendo primero dos espermatocitos secundarios y después cuatro espermátides. En las espermátides se producen algunos cambios espectaculares que las convienen en espermatozoides maduros al mismo tiempo que completan su emigración hacia la luz. Este proceso de diferenciación del espermatozoide  se denomina espermatogénesis.

Las células de Sertoli participan íntimamente en la diferenciación de los gametos. Los espermatocitos  y las espermátides en fase de maduración permanecen conecta dos a las células de Sertoli que los rodean no sólo mediante uniones íntimas y comunicantes, sino también a través de unas prolongaciones citoplasmáticas peculiares  llamadas complejos tubulobulbares que se extienden hacia el interior de las células de Sertoli. El citoplasma de los gametos en desarrollo se reduce de manera espectacular durante la espermatogénesis y se piensa que esos complejos tubulobulbares proporcionan un mecanismo que permite transferir el citoplasma sobrante a las células de Sertoli. A medida que se va eliminando el citoplasma, las espermátides experimentan los profundos cambios en el tamaño y la organización interna que las transformara en espermatozoides . En la etapa final., se rompen las últimas conexiones con las células de Sertoli y los espermatozoides se liberan hacia la luz tubular. Este paso recibe el nombre de espermiación.

Las alteraciones del espermatogenesis no son nada frecuentes. El estudio de una muestra de semen puede mostrar espermatozoides con anomalías tales como cabezas pequeñas, estrechas o piriformes( con forma de pera), cabezas dobles o triples, defectos de los acrosomas y colas dobles.

Los gametos se producen en oleadas sincrónicas en cada zona del epitelio germinal, aunque el proceso no está sincronizado a lo largo de todos los túbulos seminíferos.

En el hombre, cada ciclo de esperamtogénesis tiene una duración media de 64 días. La mitosis de las espermatogonias duran unos 16 días, la primera división meiótica comprende unos 8 días, la segunda división meiótica tarda unos 16 días y la espermatogénesis se completa en unos 24 días.

Los espermatozoides producidos en los túbulos seminíferos se almacenan en la parte inferior del epidídimo, un conducto espiral especial conectado con el conducto deferente cerca de su origen en el testículo. Durante la eyaculación, los espermatozoides son propulsados a través del conducto deferente y de la uretra, mezclándose al mismo tiempo con secreciones nutritivas procedentes de las vesículas seminales, la próstata y las glándulas bulboretrales. En una sola eyaculación puede depositar hasta 200 millones de espermatozoides en la vagina, pero solo algunos cientos de ellos logran atravesar el cuello uterino, el útero y la trompa para llegar a la región ampular espandida de esta última. En la ampolla, los espermatozoides pueden sobrevivir y conservar su capacidad de fecundar al ovocito durante 1 a 3 días.

La capacitación es el último paso del proceso de maduración del espermatozoide y consiste sobre todo en un conjunto de cambios del acrosoma que lo prepara para liberar las enzimas necesarias para atravesar la zona pelúcida, una cubierta glucoproteica que rodea al ovocito. [pic 3]

OBJETIVOS:

• Analizar la viabilidad y vitalidad de los espermatozoides en una muestra de procesada mediante la espermatobioscopia.
• Identificar las características físicas del semen.
• Observar las características morfológicas, estructurales y funcionales de los espermatozoides
• Interpretar los resultados de la espermatobioscopia y emitir una opinión diagnostica  de fertilidad o infertilidad del donante.

Materiales:

• Microscopio compuesto
• Placa de calentamiento
• Papel seda
• Termómetro
• Cámara de Newbauer
• Tubo de centrifuga cónico graduado
• Vasos de precipitado de 10 ml y 250 ml
• Papel pH
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Pipetas pasteur
• Pipeta de Thoma
• Guantes de látex
• Charola para inactivación de semen.
• Semen

REACTIVOS:

• Aceite de inmersión
• Vaselina
• Solución de bicarbonatos de sodio al 5%
• Giemsa
• Azul de tripan
• Blanqueador

METODO

• Examen físico del semen

1. Obtención de la muestra por masturbación recogiendo la muestra en un frasco de vidrio (limpio y seco).
2. Posteriormente se realiza una evaluación de la licuefacción del seme. Se introduce un palillo al semen y se retira lentamente, la muestra escurrirá en forma de hilo y luego de 30 min, se procede de la misma manera para que el escurra por goteo.
3. Se requiere una serie de evaluaciones para el examen físico:
4. Evaluación del volumen: El eyaculado se coloca en un tubo de ensaye graduado y se registra el volumen.
5. Evaluación del pH: Se mide con papel pH
6. Evaluación de color: Observe y anote el color
7. Evaluación del olor: Determine el aroma y anote.
8. Después del examen físico se realizara una examen microscópico con los siguientes parámetros:
9. Movilidad espermática. Para ver dicha movilidad se necesita un portaobjetos y un cubre objetos limpios.
10. En el portaobjetos se traza un circulo de vaselina y en medio se coloca una gota de semen y se cubre.
11. Se observara dicha preparación a 40x.
12.  De la misma forma se determinara la morfología espermática, realizando un frotis.
13. Terminado el frotis se observara a 10x,40x y 100x (con aceite de inmersión).
14. Estos resultados se anotaran en una lista indicando el porcentaje de formas normales y anormales.
15. Después de todos estos exámenes el semen se ha licuado y se aspira en una pipeta de Thoma para glóbulos blancos hasta la marca de 0.5 y el resto se llena con líquido de dilución hasta la marca 11 (bicarbonato de sodio al 5%).
16. Se agita la muestra con la pipeta horizontal hasta su completa homogenización.
17. Se desechan las tres primeras gotas.
18. Después se aplica la muestra por duplicado en la cámara de Newbauer.
19. Se deja reposar 3 minutos para proceder con el conteo al microscopio.
20. La cantidad obtenida en el conteo se multiplica por 100,000 y el resultado es el nuero de espermatozoides por ml.
21. Por último se realiza una evaluación de vitalidad
22. Se toma una muestra de semen ya licuado y teñir con negrocina-eosina
23. Observar al microscopio al 10x, 40x y 100x, verificando que el color tiñe o no a los espermatozoides.
24. Una vez terminada la práctica los desechos biológicos se limpian con hipoclorito de sodio y se desechan.

RESULTADOS

• VALORES SEGÚN LA OMS

...