Тécnicas para la extracción del ADN

El primer paso en cualquier protocolo de separación es el rompimiento del material inicial, ya sea de origen viral, bacteriano, vegetal o animal. El método utilizado para romper la célula debe ser tan leve como sea posible con el fin de causar el menor daño posible al ADN. La lisis celular se puede hacer por acción mecánica, pulverizando el tejido con hielo seco o nitrógeno líquido, también se puede utilizar la degradación enzimática de la pared celular (si está presente) y lisis con detergentes de las membranas celulares. Seguido al rompimiento celular la mayoría de métodos involucran una desproteinización, lo cual se lleva a cabo con un solvente orgánico, seguido de una precipitación con isopropanol o etanol y posterior solubilización con agua o tampón.

Existen diferentes técnicas para la extracción del ADN, aunque todas conservan el uso de los mismos principios y fundamentos.

Para obtener ADN a partir de leucocitos totales (obtenidos de sangre periférica), células en cultivo, tejidos animales, vegetales, levaduras y bacterias; se usa generalmente una técnica de cuatro pasos secuenciales:

• El primer paso consiste en la lisis de las células y los núcleos.

• Luego, la separación del ADN a partir de sangre total involucra la lisis de

eritrocitos, seguida por una lisis de leucocitos y de sus núcleos.

• Las proteínas celulares son entonces removidas por un paso de

precipitación salina, y

• Finalmente el ADN genómico es concentrado por precipitación con

isopropanol.

El ADN purificado por medio de este proceso, está listo para ser utilizado en diferentes aplicaciones, las cuales involucran: amplificaciones (PCR), digestión con endonucleasas de restricción, Southern blot y Dot blot.

Existen otras técnicas que permiten la obtención de ADN genómico a partir de muestras sólidas y líquidas, que permiten la separación simple, rápida, segura y eficiente del ADN. Esta separación se basa en la utilización del isotiocianato de guanidina, como solución de lisis celular, lo cual permite una precipitación selectiva del ADN con etanol y solubilización en agua o en 8 mM de NaOH. Este procedimiento se puede realizar en 30 minutos, recobrando un 70% a un 100% del ADN.

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