Hidroliza a la sacarosa
Enviado por feerkj • 10 de Mayo de 2015 • 244 Palabras (1 Páginas) • 184 Visitas
La invertasa es una enzima que hidroliza a la sacarosa generando fructosa y glucosa. Dado que la sacarosa es un azúcar no reductor, la actividad se determina midiendo el aumento de grupos reductores (glucosa y fructosa) por el método de DNS (ácido dinitrosalicílico).
1. Prepara una solución de invertasa de 100 µg/mL en solución amortiguadora de acetatos (0.05 M, pH 4.7).
2. Prepara una solución al 2.5% (p/v) de sacarosa en la solución amortiguadora.
3. Coloca 9 mL de la solución de sacarosa en dos tubos de ensaye (1 y 2).
4. Coloca los tubos en un baño de temperatura controlada a 45 ºC (por lo menos durante 10 min antes de empezar la reacción).
5. Preparar una serie de 8 tubos para cada tubo, marcados como sigue: 1’(1), 3’(1), 5’(1), 10’(1), 15’(1), 20’(1), 25’(1) y 30’(1), marca de igual forma para el tubo 2 y marcar un tubo como “blanco”, lo que hace un total de 17 tubos. Agrega 1 mL del reactivo DNS a cada uno de los 17 tubos.
Reacción Enzimática
1. Agrega 1 mL de la solución de la enzima al tubo número 1, registra el tiempo exacto de la adición. Agita y regresa el tubo al baño de agua y espera. Toma 1 mL de la mezcla de reacción de tal modo que al minuto exacto de la adición de la enzima, sea vaciado al tubo con DNS marcado 1’(1). La reacción enzimática se detiene al entrar en contacto con el DNS.
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