Cultivo celular
Enviado por lulu_ssc • 23 de Agosto de 2018 • Apuntes • 345 Palabras (2 Páginas) • 83 Visitas
Análisis de Artículo
En un sistema acuoso de dos fases (ATPS) aparecen restricciones. No hay una predicción confiable ya que una alta concentración de sales (30% en adelante) hace que haya interferencia en el método de absorbancia óptica ya que puede tomar otros compuestos además de la proteína de interés. Por esto proponen usar ensayos colorimétricos ya que el estimado de la concentración de la proteína a través de colorantes resulta que no haya interferencia con la absorbancia. La fotometría ayuda a que se reduzca el volumen de la mezcla y que haya mas numero de muestras.
Las técnicas de cuantificación que se usaron fueron la de Bradford(Colomassie Brilliant Blue), DC (Bio Rad)(Deep blue staining) y Ninhydrin( Blue violet dye). Se analizaron dos proteínas de interés BSA Y RNase con concentraciones del los solvente PEG400, PEG20000 y sales de fosfato a 1%, 5%, 15% y 30%.
Los aspectos que se deben de considerar es que tipo de proteína y grupos funcionales estas analizando. Si la proteína de interés no tiene residuos de arginina el método Bradford no es el indicado. Al igual tienes que considerar que medio vas a utilizar, por ejemplo en el análisis de BSA Y RNase tuvo menor recuperación con PEG20000 ya que hay una interferencia con la unión de PEG con la proteína. Además se debe de considerar diluir el factor ATPS 1%PEG y 10% de sales,
Idealmente no debe de haber interferencias de otros compuestos en la absorbancia,
debe ser aplicable en entornos ricos en sales de polímeros, independientemente de la proteína de interés.
Se concluyó que la prueba de Ninhydrin era la mas optima, después DC y al final Bradford ya que no tuvo resultados al 1% con el RNase. El DC demostró recuperación alta de proteínas a concentraciones bajas de ATPS. Al igual, con sales de fosfato se demostró que hubo en general sobreestimaciones, ya que reduce la viabilidad de los solventes.
Referencia González-González, M., Mayolo-Deloisa, K., Rito-Palomares, M., & Winkler, R. (2011). Colorimetric protein quantification in aqueous two-phase systems. Process biochemistry, 46(1), 413-417.
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