DETERMINACIÓN EN CULTIVOS CELULARES Y EN HUMANOS DE IL-6 COMO MARCADOR DE ENFERMEDAD Y ENVEJECIMIENTO

Buenos dias ingeniero buenos dias compañeros presentes

DETERMINACIÓN EN CULTIVOS CELULARES Y EN HUMANOS DE IL-6 COMO MARCADOR DE ENFERMEDAD Y ENVEJECIMIENTO

El envejecimiento y las enfermedades son procesos que están relacionados. Estos se pueden caracterizar por la disminución de la regeneración celular, disfuncionalidad en órganos, y degeneración tisular. Dentro de los biomarcadores propuestos en la literatura científica, encontramos a las citoquinas que cumplen roles biológicos y no solo inmunológicos como se creía antes.

La IL-6 es una citoquina pre y pro inflamatoria, con la capacidad actuar sobre todas las células gracias a la forma soluble del receptor que también posee un fenómeno que se conoce como transeñalización. Además, la expresión anormal de la misma está directamente relacionada con la patogénesis de varias enfermedades como el c y enfermedades inmu, convirtiéndola en un biomarcador ideal para el estudio.

OG Determinar si existe asociación entre el aumento de los niveles de IL-6 en enfermedades crónicas y envejecimiento.

OE

Determinar los niveles de IL-6 en línea celulares sanas y pacientes sanos.

Determinar los niveles de IL-6 en línea celulares con cáncer mamario.

Determinar in vivo los niveles de IL-6 en relación con la edad.

Determinar la relación de los niveles de IL-6 de pacientes sanos y pacientes con enfermedades crónicas.

MATERIAL BIOLÓGICO

 Línea celular WIL-2 NS (línea celular Linfocitos B humano).

 Línea celular MDA-MB 231 (Células de cáncer de mama).

 Pacientes sanos de diferentes edades.

 Pacientes con enfermedades crónicas de diferentes edades.

MATERIAL DE LABORATORIO

Frascos para cultivo celular Falcon® de 50 ml.

 Placas para cultivo de 6, 24 y 96 pozos.

 Pipetas graduadas de 1, 5 ,10 y 25 ml.

 Tubos de ensayo.

 Micropipetas graduadas de 5, 20, 100 y 1000 μL.

 Tubos de centrífuga Falcon® de 15 y 50 ml.

 Tubos eppendorf de 1.5 - 2ml.

 Espectrofotómetro para microplacas Mindray MR-96ª

 Lavador automático para microplacas Mindray MW-12.

 Microscopio invertido Olympus.

 Celulometro® Auto T4.

 Centrifuga.

 Incubadora de CO2.

 Nevera

 Congelador.

 Criopreservador.

 Cabina de bioseguridad Clase II tipo A2 ESCO.

 Baño termostático.

Métodos

Cultivo in Vitro

Las líneas celulares anteriormente mencionadas fueron iniciadas con un cultivo en medio DMEM para la línea celular de adenocarcinoma mamario y el medio RPMI para la línea de linfocitos B sanos.

Cada medio fue preparado con 10 % de suero fetal bovino y 1% de antibiótico.

Se verificó el crecimiento celular cada 12 horas, en un promedio de 5 a 8 días.

Posterior al cultivo primario se realizó un subcultivo, previa verificación de la viabilidad del cultivo.

...