Practica de vías respiratorias

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DIAGNOSTICO DE VIAS RESPIRATORIAS

FRIDA IVETTE ROMAN RAMOS

SENOBIA ROSALIA CRUZ LUMBRERAS | LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA | 16/04/18

INDICE

Tabla de contenido

INDICE        2

INTRODUCCION        3

COMPETENCIAS        3

ACTIVIDADES        3

GUIA DE ESTUDIO        3

1.        DESCRIBA USTED LAS INDICACIONES NECESARIAS AL PACIENTE PARA LA IDENTIFICACION MICROBIOLOGICA DE PROCESOS INFECCIOSOS EN VIAS RESPIRATORIAS.        3

MÉTODOS        3

2.        ENLISTE USTED LOS MICROORGANISMOS QUE SE CONSIDERAN COMO FLORA NORMAL DE LAS VIAS RESPIRATORIAS.        5

3.        ENLISTE USTED LOS PRINCIPALES PATOGENOS DE VIAS RESPIRATORIAS QUE REPRESENTAN UN PROBLEMA DE SALUD.        6

4.        MEDIANTE UN ESQUEMA DESCRIBA USTED LA METODOLOGIA A SEGUIR EN EL LABORATORIO PARA IDENTIFICION DEL AGENTE ETIOLOGICO EN PROCESOS INFECCIOSOS DE LAS VIAS RESPIRATORIAS.        6

5.        ENUNCIE LAS COMPLICACIONES POR INFECCIONES ESTREPTOCOCICAS Y LAS PRUEBAS SEEROLOGICAS COMPLEMENTARIAS PARA SU CONTROL ANTIESTREPOLISINAS, PROTEINA C REACTIVA Y FACTOR REUMATOIDE.        7

CONCLUSION        8

BIBLIOGRAFIA        9

INTRODUCCION

Las infecciones del tracto respiratorio superior ( TRS ) son en su conjunto la patología más común a nivel mundial, y aunque las  afecciones adquiridas en la comunidad no son causa de alta mortalidad, su amplia morbilidad la coloca en la de mayor consulta médica, especialmente por  la faringoamigdalitis aguda, la otitis media aguda y la sinusitis aguda.

Un problema particular de éstas infecciones  radica en el  uso y abuso de antibióticos utilizados para tratar de controlar la infección,  estimándose que el 75% de los antibióticos utilizados en forma ambulatoria no corresponden al tratamiento correcto, por lo que el errado tratamiento de ésta patología es la mayor causa de la posterior resistencia a los antibióticos. En éste sentido el trabajo del microbiólogo al reportar un cultivo ha de ser de gran ayuda en el control del abuso de los antibióticos.

Una de las particularidades del tracto respiratorio es que se trata de orificios abiertos en los que la microbiota  contempla en muchos casos el conocimiento de los agentes etiológicos  saprofitos, por lo que el tomar en cuenta  la microbiota  del área es requisito indispensable en la evaluación del cultivo.

Por lo anterior, ponemos a la disposición de los microbiólogos el presente protocolo que pretende orientar sobre las patología asociadas a las infecciones del tracto respiratorio superior, como la de establecer las pautas de la correcta evaluación y reporte de los cultivos de las vías respiratorias alta.

COMPETENCIAS

Identificar a través de un cultivo la presencia de microorganismos de importancia medica causantes de procesos infecciosos en vías respiratorias altas y determinar su sensibilidad a antibióticos.

ACTIVIDADES

1. Revisión bibliográfica individual y en equipo.
2. Discusión grupal dirigida.
3. Desarrollo de la práctica.
4. Comentarios y conclusiones.
5. Elaboración del reporte.

GUIA DE ESTUDIO

1. DESCRIBA USTED LAS INDICACIONES NECESARIAS AL PACIENTE PARA LA IDENTIFICACION MICROBIOLOGICA DE PROCESOS INFECCIOSOS EN VIAS RESPIRATORIAS.

MÉTODOS

Este trabajo es un estudio descriptivo, transversal y analítico. Se trabajó con 32 aislamientos de Streptococcus pneumoniae, obtenidos por métodos microbiológicos convencionales, a partir de pacientes con infecciones respiratorias. 19 de los 32 aislamientos fueron remitidos por los laboratorios del Instituto Gastroenterológico Boliviano Japonés, Escuela Técnica de Salud, Hospital Albina Patiño, Seguro Social Universitario y Hospital Elizabeth SETON, al Laboratorio Asistencial y Laboratorio de Biología Molecular de la Facultad de Bioquímica y Farmacia de la Universidad Mayor de San Simón; 8 de los 32 aislamientos se obtuvieron en el Laboratorio Asistencial de la Facultad de Bioquímica y Farmacia de la Universidad Mayor de San Simón, a partir de 40 muestras clínicas de pacientes con diagnóstico de neumonía hospitalizados en el Complejo Hospitalario Viedma, de acuerdo a criterios de inclusión, según convenio establecido con la jefatura de Infectología de dicha institución y 5 de los 32 aislamientos, se obtuvieron de 103 muestras clínicas con diagnóstico presuntivo de tuberculosis pulmonar y con BAAR negativo procedentes de la Escuela Técnica de Salud e Instituto gastroenterológico. Los 32 aislamientos de Streptococcus pneumoniae se obtuvieron en el periodo de Octubre 2007 a Noviembre 2008.

La toma de muestras se realizó de acuerdo a protocolos establecidos en el Laboratorio Asistencial de la Facultad de Bioquímica y Farmacia.

Métodos microbiológicos

Para la identificación microbiológica se realizó el cultivo en medio Agar sangre, tinción de gram, la reacción negativa a la catalasa de la colonia sospechosa y la prueba de la optoquína.13

Susceptibilidad a penicilina y eritromicina

Para determinar la susceptibilidad a estos antibióticos se realizó un antibiograma, siguiendo el método de Kirby Bauer, utilizando discos de oxacilina de 1 ug, considerando como SDP (sensibilidad disminuida a la Penicilina) cuando presenta un halo de inhibición menor a 19 mm8 y para la eritromicina un disco de 15 ug, considerando resistente con un halo igual o menor a 15 mm y resistencia intermedia con un halo de 16-20 mm.

Métodos moleculares de confirmación

Para confirmar los aislamientos de Streptococus pneumoniae, se realizó la extracción de ADN, tomando algunas colonias y resuspendiendo en un Buffer (Tris-HCl10mMEDTA1mM), llevando a Baño Maria por 20 minutos, y agregando cloroformo, después de la centrifugación se separó la fase acuosa que contenía el ADN crudo, con el cual se realizó la reacción en cadena de la polimerasa. Los cebadores utilizados fueron Lyt A y Ply, descritos por Suzuki et al.4 Lyt A amplifica la región que codifica para la autolisina en Streptococcus pneumoniae y genera un producto de amplificación de 308 pb y Ply amplifica una región del gen de la pneumolisina de 329 pb. Las secuencias de los cebadores utilizados fue: Lyt A 5´- CAA CCG TAC AGA ATG AAG CGG - 3` y 5´ - TTA TTC GTG CAA TAC TCG TGC G - 3. Cebadores Ply ; 5´- ATT TCT GTA ACAGCT ACC AAC GA - 3` y 5´ – GAA TTC CCT GTC TTT TCA AAG TC-3.

Las condiciones de amplificación fueron: Desnaturalización inicial 94 ºC por 5 minutos y 35 ciclos de desnaturalización 94 ß C por 10 segundos, hibridación a 58 ºC por 15 segundos, elongación a 72ºC por 1 minuto y elongación final a 72 ºC por 7 minutos. Los productos obtenidos fueron revelados por electroforesis en gel de agarosa al 1,2% y con bromuro de etidio 0.5 µg / ml.

Métodos serológicos

Para determinar la presencia del antígeno capsular, se utilizó el test BBL PNEUMOSLIDETM, es un método serológico de aglutinación en látex para la detección cualitativa de antígenos capsulares de Streptococcus pneumoniae, a partir de colonias aisladas o cultivos puros.

Comparación de métodos para reconfirmación de Streptococcus pneumoniae

Con el fin de evaluar los tres métodos con fines de reconfirmación, se trabajo con 27 de los 32 aislamientos iniciales, utilizando los métodos descritos anteriormente.

Análisis estadístico

Los análisis estadísticos fueron realizados con el programa SPSS, utilizando la prueba de chi-cuadrado de bondad de ajuste por el número de muestras, para determinar las diferencias entre los grupos etáreos y épocas estacionales.

Para establecer la diferencia de susceptibilidad a los antibióticos se utilizó el test de proporción con un 95% de intervalo de confianza.

Finalmente para comparar los métodos por su reproducibilidad con fines de reconfirmación, se realizó una valoración de sensibilidad y especificidad de la prueba molecular y la prueba serológica frente a la prueba de la optoquina.

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1. ENLISTE USTED LOS MICROORGANISMOS QUE SE CONSIDERAN COMO FLORA NORMAL DE LAS VIAS RESPIRATORIAS.

Flora del aparato respiratorio:

El aparato respiratorio es dividido en dos sectores anatómicos: alto y bajo. En el sujeto normal solamente el árbol respiratorio alto (fosas nasales y faringe) presenta flora normal; los senos paranasales, oído medio, tráquea, bronquios pulmonares y pleura son estériles.

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