Biologia Celular

RESUMEN

A través del presente informe se procederá a explicar de una forma clara y concisa el análisis comparativo de diversas células las cuales fueron encontradas en muestras sanguíneas tomadas de distintos animales y de seres humanos: como del perro, pescado, vaca, sapo, conejo, camarón, niño, adolescente y anciano. Gracias a la extracción sanguínea pudimos obtener las diferentes muestras las cuales eran esenciales para esta práctica; teniendo ya la muestras se realizó un frotis para de esta forma poder observar a través del microscopio, gracias a la explicación previa del docente se realizó correctamente este frotis para su posterior observación y conteo de glóbulos blancos. Una vez realizado ya el frotis es de esencial importancia pigmentarlo con Giemsa el cual nos proporcionara una mejor vista microscópica, para el correcto enfoque se empieza por el lente objetivo de 4x a medida que vayamos cambiando de lente la imagen se aclara y cuando llegamos al lente de 100x es muy importante colocar aceite el cual nos permitirá visualizar una imagen nítida de la muestra estudiada, para el conteo de glóbulos blancos se utiliza la cámara de Neubauer en la cual encontraremos cuatro segmentos en los cuales debemos realizar el respectivo conteo de glóbulos blancos que se encuentren dentro del perímetro establecido solo de esta forma llegaremos a obtener un conteo adecuado el cual se encuentre dentro del rango.

RESUMEN

A través del presente informe se procederá a explicar de una forma clara y concisa el análisis comparativo de diversas células las cuales fueron encontradas en muestras sanguíneas tomadas de distintos animales y de seres humanos: como del perro, pescado, vaca, sapo, conejo, camarón, niño, adolescente y anciano. Gracias a la extracción sanguínea pudimos obtener las diferentes muestras las cuales eran esenciales para esta práctica; teniendo ya la muestras se realizó un frotis para de esta forma poder observar a través del microscopio, gracias a la explicación previa del docente se realizó correctamente este frotis para su posterior observación y conteo de glóbulos blancos. Una vez realizado ya el frotis es de esencial importancia pigmentarlo con Giemsa el cual nos proporcionara una mejor vista microscópica, para el correcto enfoque se empieza por el lente objetivo de 4x a medida que vayamos cambiando de lente la imagen se aclara y cuando llegamos al lente de 100x es muy importante colocar aceite el cual nos permitirá visualizar una imagen nítida de la muestra estudiada, para el conteo de glóbulos blancos se utiliza la cámara de Neubauer en la cual encontraremos cuatro segmentos en los cuales debemos realizar el respectivo conteo de glóbulos blancos que se encuentren dentro del perímetro establecido solo de esta forma llegaremos a obtener un conteo adecuado el cual se encuentre dentro del rango.

INTRODUCCIÓN

Los leucocitos o glóbulos blancos son células móviles que se encuentran en la sangre transitoriamente así, forman la fracción celular de los elementos figurados de la misma. A diferencia de los glóbulos rojos, no contienen pigmentos, por lo que se le califica como glóbulos blancos, son capaces de moverse libremente, su tamaño oscila entre los 8 y 20 μm. Su tiempo de vida varía desde algunas horas, meses y hasta años. Los glóbulos blancos son estructuras microscópicas para su correcta observación es indispensable el uso adecuado del microscopio al igual que saber enfocar correctamente ya que como futuros laboratoristas, esto garantizará un buen trabajo y resultados confiables, es muy importante adquirir destreza, observar y reconocer de una forma precisa ya que esto en muy importante para un profesional del área de salud.

1. OBJETIVOS

1.1 Objetivo General

Comparar la morfología de nuestras células blancas sanguíneas de diferentes muestras de animales.

1.1 Objetivos Específicos

Obtención de la muestra sanguínea del pollo, conejo, pez, humano, vaca, cerdo, etc.

Preparar la muestra correctamente.

Comparar la morfología de las células.

Comparar los contajes celular.

2. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA

2.1 Glóbulos Blancos

Los leucocitos o también sean llamados glóbulos blancos son un conjunto heterogéneo de células sanguíneas que son ejecutoras de la respuesta inmunitaria, interviniendo así en la defensa del organismo contra sustancias extrañas o agentes infecciosos (antígenos). Se originan en la médula ósea y en el tejido linfático.

2.1.2 Cámara de Neubauer

La cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar el recuento de células en un medio líquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc.

Esta cámara de recuento está adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas en cuyo fondo se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones conocidas. Se cubre la cámara con un cubreobjetos que se adhiere por simple tensión superficial (en especial una vez que se haya añadido la muestra líquida).

Luego se introduce, por capilaridad entre la cámara y el cubre, el líquido con las células a contar, generalmente tras una dilución previa; puesto que la cámara tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultáneamente. Se observa la retícula al microscopio con el aumento adecuado y se cuentan las células.

A partir del número de células contadas, conociendo el volumen de líquido que admite el campo de la retícula, se calcula la concentración de células en la muestra líquida aplicada.

2.2 Giemsa

La tinción de Giemsa es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos, cortes histológicos y otro tipo de muestras biológicas. Este método tiene utilidad sobre todo para poner de manifiesto las rickettsias localizadas dentro de las células huéspedes. La coloración de giemsa se emplea también para teñir frotis de sangre en el examen para protozoos. Se puede emplear, como variaciones, otras coloraciones como es la técnica de citoconcentración para parásitos sanguíneos.

2.2.1 Frotis

Un frotis o extendido de sangre es un mecanismo científico que consiste en el extendido de una gota de sangre en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla posteriormente.

Extensión en el portaobjetos

Para llevar a cabo las extensiones en portaobjeto se coloca una gota de sangre de 3 a 4 mm de diámetro, a unos 2 o 3 cm de uno de los extremos del portaobjetos este se coloca en una superficie plana y lisa. Con el borde de otro portaobjeto, con el que se toca la gota de sangre, la cual se desliza por capilaridad a todo lo largo del canto de dicho portaobjeto y con un movimiento rápido y uniforme, en un ángulo de 45 grados se desliza el portaobjetos dejando una capa de sangre en la superficie del otro. El espesor del extendido debe ser delgado.

3. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 Sangre de pescado

Esta muestra fue tomada con la ayuda del docente, ya que el pez tiene que ser abierto por la parte anterosuperior en la zona de la laguna venosa en el punto ventral. Con una aguja que se utiliza para inyectar la insulina fue tomada la sangre pez, y de forma inmediata esta muestra se la coloco en un tubo con anticoagulante (EDTA), para así evitar su coagulación.

3.1.1 Sangre de pollo

Esta muestra es tomada de la parte inferior del ala del pollo ya que en ese lugar es mucho más fácil realizar la punción, esta se realiza con la aguja más pequeña y con una jeringuilla que contenga anticoagulante.

3.1.2 Sangre de conejo

Para obtener la muestra sanguínea del conejo se realizó una punción venosa en la pierna del mismo, ya que en ese sitio es muy fácil la punción; al igual que para las otras tomas de muestras se necesita un frasco con anticoagulante.

3.1.3 Sangre de camarón

Se realiza la punción en la parte superior de primer segmento, teniendo en cuenta que de un camarón de 5gr y gracias a una punción bien realizada se puede obtener hasta 1 ml de hemolinfa.

3.1.4 Sangre humana

Esta punción es muy conocida para todos los que realizamos la practica ya que es un de las primeras que nos enseñaron. Consiste en realizar una punción venosa, en la parte media del brazo exactamente en el punto de unión del brazo y antebrazo, con ayuda de un torniquete, jeringuilla y un recipiente con anticoagulante.

3.1.5 Sangre de vaca

Para obtener la muestra sanguínea, se cortó la oreja a la vaca y si se logró tener la sangre en un tubo con anticoagulante.

3.2 Preparación de placas

Una vez obtenida la muestra de sangre de pescado se colocó una gota de la misma en el portaobjetos con la finalidad de realizar un frotis el cual era muy importante para su observación a través del microscopio.

1.- Colocar una gotita de sangre en el portaobjetos.

2.- con el cubreobjetos realizar un frotis sobre el portaobjetos.

3.- Procurar no dejar espacios de aire en el frotis.

3.2.1 Coloración de la placa

Una vez terminado el frotis se procede a pigmentar la placa con GIEMSA, el cual es un colorante el cual nos permite teñir la placa de un color morado intenso, permitiendo así muy mayor visibilidad de la muestra a través del microscopio.

3.3 Observación de células blancas a través del microscopio

Una vez realizado el frotis correctamente se procede a enfocar la placa empezando siempre por el lente de menor aumento y mientras necesitemos agrandar la imagen se debe cambiar el lente objetivo por uno de mayor aumento, en la placa que contenía la muestra sanguínea del pescado no se pudo observar nada ya que por la mínima cantidad de sangre que so logro extraer esta se Homogenizo.

De esta forma se logró extraer la muestra sanguínea, realizar el frotis para posteriormente ser observadas a través del microscopio.

Imagen N°-1 Realizar un corte en la zona ventral N°-2 Encontrar la zona de la laguna venosa

Imagen N°-3 Extracción sanguínea Imagen N°-4 observación de todas la muestras sanguíneas

3.4 Observación y diferenciación de células blancas en la muestra sanguínea de pescado.

Una vez realizado el frotis y su tinción se procede a observar a través de microscopio, el cual nos ayudara a localizar glóbulos blancos para su posterior conteo. Lamentablemente nuestra muestra se encontraba homogenizada por lo que no pudimos observar nada.

Imagen N°-5 Colocación de GIEMSA en la Imagen N°-6 Coloración del frotis

muestra sanguínea solución 1 en 10.

Imagen N°-7 Observación de la muestra de pescado homogenizada

4. Resultados y discusiones

Después de haber realizado todos los pasos expuestos por el docente se pudo observar en la mayoría de placas células blancas, y se pudo realizar el conteo respectivo de los mismo, en la placa que no se pudo observar glóbulos bancos ni realizar en conteo fue en la de pescado que como ya expuesto anteriormente se homogenizo gracias a la cantidad mínima de sangre que se pudo obtener.

4.1 Importancia de una buena tinción de la placa.

Las diferentes tinciones con giemsa, son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean visualizadas microscópicamente con mayor facilidad.

4.2 Reconocer células blancas y hacer un buen conteo en la cámara de Neubauer.

Una vez realizado la solución 1 en 10. Se procede a colocar en la cámara de Nuebauer, la cual nos facilitara el conteo de células blancas en sus diferentes cuadriculas, los glóbulos blancos se miran como pequeños puntos negros en la placa.

Imagen N°-8 Observación de muestra de pescado en la cámara de Neubauer.

Imagen N°-9 conteo de un cuadro grande en la cámara de Neubauer y recuento de cinco cuadros grandes

4.3 Observación de la muestra de pescado

Observación de una muestra sanguínea homogenizada de pescado

Aumento de 40x

Imagen N°-10 Placa de pescado

4.3.1 observación de células ovaladas.

Observación de células ovaladas de pollo teñidas con GIEMSA.

Aumento 40x

Imagen N°- 12 células de pollo.

4.3.2 Observación de muestra sanguínea

Observación de células blancas, tomadas de una muestra sanguina de un adolescente

Aumento: 40x

Imagen N°-13 muestra sanguínea de un adolescente.

4.3.3 Observación de una placa portadora de células estrelladas.

Observación de células estrelladas en una muestra sanguínea de cerdo.

Aumento de: 40x

Imagen N°-14 muestra sanguínea de cerdo

4.3.4 Observación de células blancas

Observación de células blancas ovaladas, de adulto.

Aumento 40x

Imagen N°- 15 células de persona adulta.

4.3.5 Observación de células blancas.

Observación de células de conejo con forma estrelladas.

Aumento de 40x

Imagen N°14 Células de conejo

4.3.6 Observación de células de vaca

Observación de células sanguíneas de vaca.

Aumento de: 40x

Imagen N°- 15 Células de vaca

4.4 Conteo de células blancas y su resultado

Vaca Perro Niño Conejo Cerdo Pescado

A 43 72 47 17 44 0

B 53 51 53 22 43 0

C 39 77 60 18 57 0

D 32 64 48 24 51 0

Total 41.75 66 52 20.25 48.75 Muestra homogenizada

5. Conclusiones

Una vez terminada la práctica pudimos darnos cuenta la importancia que tiene extraer correctamente sangre de los distintos animales que fueron estudiados al igual que en la extracción sanguínea de los humanos, una mala extracción puede ocasionar que la sangre se homogenice, como sucedió con la muestra del pescado y así no poder observar las células blancas para su posterior conteo.

La técnica de tinción de la placa radica en realizar un buen frotis y en su correcto lavado este debe hacerse de arriba hacia abaja evitando que el agua llegue con fuerza a la placa, ya que si esto pasa se dañaría en su totalidad y tendríamos que repetir el proceso.

Para la utilización de la cámara de Neubauer hay que realizar una solución de 1 en 10ml, es decir, por cada 10ml de sangre colocar 1ml de Giemsa que es el colorante que usamos en esta práctica. Teniendo ya está solución se procede a colocar con mucho cuidado y con la ayuda de una pipeta en la cámara de Neubauer para realizar el conteo respectivo de células blancas.

6. Bibliografía

1. R., García. Ecu Red. Ecu Red. [En línea] microorganismos , 24 de 3 de 2009. [Citado el: 2 de 10 de 2014.] http://www.ecured.cu/index.php/Microorganismo.

2. Biomodel. Ecuafenix. Ecuafenix. [En línea] CIS PUEBLA, 25 de 6 de 2012. [Citado el: 2 de 10 de 2014.] http://www.ecofenix.com.mx/.

3. libre, enciclopedia. Wikipedia . Wikipedia. [En línea] creative commons, 14 de 7 de 2010. [Citado el: 2 de 10 de 2014.] http://es.wikipedia.org/wiki/Larva.

4. Olivia, Luis. Wikipedia . Wikipedia. [En línea] 23 de 8 de 2009. [Citado el: 2 de 10 de 2014.] http://es.wikipedia.org/wiki/Placa_de_laboratorio.

7. ANEXOS

Imagen N°- 1 Observación de todas las muestras sanguíneas.

• En esta imagen se puede observar todas las muestras que fueron usadas para la práctica, de izquierda a derecha se encuentran las muestras de: vaca, anciano, adolescente, perro, pollo, pollo, conejo, chancho.

Imagen N°- 2 Realizar una solución con Giemsa

• En esta imagen se puede apreciar cómo se realiza una solución de por cada 10ml de sangre 1ml de giemsa.

Imagen N°- 3 Tinción del frotis.

• La buena tinción del frotis depende que este sea totalmente cubierto con el colorante que se esté utilizando.

Imagen N°-4 Extracción de sangre de pescado

• El pez tiene que ser abierto por la parte anterosuperior en la zona de la laguna venosa en el punto ventral.

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