ADN Vegetal

PRACTICAS DE LABORATORIO

BIOQUÍMICA II

FUNDAMENTO

La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos

son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior

extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente,

vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN.

En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN,

carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al

ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él

por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y

detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico.

MATERIAL Y REACTIVOS

•Muestra vegetal

•Agua (destilada o mineral)

•Sal de mesa

•Bicarbonato sódico

•Detergente líquido o shampú

•Alcohol isoamílico a 0ºC

•Batidora

•Nevera

•Colador o centrífuga

•Vaso

•Tubo de ensayo

•Varilla fina

REALIZACIÓN

1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener esta solución en la nevera en un baño de hielo triturado:

120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral.( No usar agua del grifo.)

1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.

5 g de bicarbonato sódico.

5 ml de detergente líquido o champú.

2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a

impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.

4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío

y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos

vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más

fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear

el sobrenadante.

5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de

alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por

la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando

sobre el tampón.

6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación

entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a

poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un

minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará

adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

7. Observar las fibras obtenidas al microscopio y realizar una tinción simple, comparar esta técnica con la de obtención de DNA de tejidos animales.

RESULTADOS

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado

con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas

que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

REPORTE.

1.- Explique la función que desempeña el alcohol isoamílico frío en la obtención del DNA

2.- Porque

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