Asignatura “Biología celular” Práctica de Extracción de ADN

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Universidad Juárez Autónoma de Tabasco

División académica multidisciplinaria de Jalpa de Méndez

Profesor Candelario Rodríguez Pérez

Asignatura “Biología celular”

Práctica de Extracción de ADN

Fecha de entrega 07 de Marzo del 2018

Integrantes del equipo:

• José Antonio Ovando Ricárdez
• Karla María Montero Rodríguez
• Eduardo Jesús Hernández Orueta
• Roberto Carlos Ricárdez Córdova
• Priscila Guadalupe Lázaro Triano

Introducción[pic 2]

Las características de un organismo están especificadas en su información genética, la cual está representada como una secuencia de ácidos nucleicos, donde la suma total de esta secuencia es lo que conforma su genoma. Quizás de los procedimientos en biología molecular, el más básico es la purificación de ácidos nucleicos, en la forma de ADN o ARN.

Por lo tanto, se requieren métodos seguros para la separación de estos componentes de las células. Para lograr esto, se utilizan diversos métodos de extracción dependiendo del tipo de tejido a emplear, fresco, seco o congelado.

El ADN es el ácido desoxirribonucleico responsable de contener toda la información genética de un individuo o ser vivo, información que es única e irrepetible en cada ser ya que la combinación de elementos se construye de manera única.

Este ácido contiene, además, los datos genéticos que serán hereditarios, o sea que se transmitirán de una persona a otra, de generación en generación, por lo cual su análisis y comprensión resulta ser de gran importancia para realizar cualquier tipo de investigación científica o aventurar una hipótesis que verse sobre la identidad o sobre las características de un individuo, el cual se encuentra en las células de los seres vivos.

La célula es la unidad fundamental de la vida para todos los seres vivos, ésta realiza tres tipos de funciones: la nutrición, la relación y la reproducción. Tareas que conllevan a la formación de un organismo. También una célula está constituida por diversos orgánulos que pueden ser comparados con nuestros órganos del cuerpo, puesto que cada uno tiene una función específica y cada uno es diferente a los demás.

Existen diversos tipos de células (eucariotas y procariotas), en este caso para dicha práctica se utilizó una muestra de tomate, los vegetales están formado por células eucariotas de tipo vegetal, que se pueden diferenciar a simple vista desde un microscopio puesto que las células de tipo vegetal contienen una pared celular que da soporte a la célula, tiene una forma hexagonal, contienen orgánulos como los cloroplastos encargados de la fotosíntesis y existen vacuolas más grandes.

También recordemos que orgánulo que se encuentra en el centro de las células eucariotas y es el encargado de dar las órdenes a la célula es el núcleo, el cual cumple la función de un cerebro en el cuerpo humano.

El ADN de los organismos eucariontes lo podemos encontrar en el núcleo de las células de forma muy compacta en cromosomas, Son los responsables del transporte, copia y distribución de toda la información genética de un individuo.

Ahora bien, recordemos que también la célula se encuentra cubierta por una membrana plasmática la cual otorga protección de la célula mediante delimitación del medio interno y externo de la célula, formada así por lípidos sintetizados por el RE Liso.

La extracción de ADN conlleva muchas etapas antes de poder llevarse a cabo, puesto que los ácidos nucleicos no se encuentran de formar externa en la célula, ya que sabemos que al estar inmerso en la célula se tienen que llevar muchos pasos antes de poder llegar a los resultados.

Uno de los pasos fundamentales para la extracción es romper con la membrana celular y en el caso de esta muestra al ser una de origen vegetal también se buscará romper la pared celular, porque como vimos antes es la encargada de proteger a la célula y de darle soporte.

También se necesitan de otras etapas para poder aislar el ADN por completo porque recordemos que éste se encuentra asociado con muchísimas proteínas que lo ayudan y por ende se necesitarán degradarse para poder quedarse con la molécula esperada.

Una de las herramientas muy importantes para poder observar mejor nuestra muestra son las cámaras de electroforesis que una vez terminado todo el procedimiento las cuales realizan una función similar a la de un microscopio el cual permite visualizar microorganismos y estructuras similares, y por lo tanto la electroforesis nos ayuda a observar los ácidos nucleicos y proteínas con una mayor claridad.

Lo que se espera con esta práctica es que nosotros como estudiantes podamos aprender a usar esta técnica para saber hacer extracciones por medio de pequeñas muestras como por ejemplo una muestra de saliva o de un cabello en el caso de células animales o de pequeñas partes de frutas en el caso de células de origen vegetal.

Metodología[pic 3]

A continuación, se presentan los distintos métodos utilizados para llevar a cabo la extracción del ADN de una muestra de origen vegetal (tomate).

Los materiales que se utilizan para dicha práctica son los siguientes:

> Buffer de lisis celular

• 50Mm Tris-HCL pH 8.0
• 1% de SDS
• 15 Mm NaCl[pic 4]

> Buffer de lisis nuclear

• 10 Mm Tris base
• 5 Mm EDTA

> Alcohol etílico

> Pipeta

> Papel filtro

> Tubo falcon 15ml

> Frasco de 250ml

> Pizeta (Alcohol etílico)

> Mortero

> Muestra de origen vegetal (en este caso tomate)

Los pasos a seguir para la extracción de ADN son los siguientes:

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1.-  Limpiar el área a utilizar con etanol al 98%

2.-  Para comenzar con el procedimiento se tiene que hacer es tomar una pequeña muestra del organismo escogido el cual será puesto en un mortero para después añadirle proteinasa, la cual tiene como función romper los enlaces peptídicos de las proteínas. Posteriormente con ayuda del mortero se triturará la muestra hasta que se mezcle con la proteinasa lo cual dura unos minutos, después se tiene que vertir lo obtenido a un tubo volumétrico.[pic 6]

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