Extracción de ADN de muestra vegetal

TEMA:

Extracción del ADN

Objetivos:

Extracción de ADN de muestra vegetal

Observar la estructura fibrilar del ADN

Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quimico-fisicas del ADN

INTRODUCCIÓN:

ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes están formados.

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol

Marco Teórico:

ÁCIDOS NUCLEÍDOS

Son moléculas constituidas por C, H, O, N y P. Relacionados con la conservación, constituye el material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes están formados. Recomponen de un pequeño grupo de unidades monomericas denominadas nucleótidos, unidos mediante enlaces covalentes fosfodiester.Tenemos:

El ADN:

Está formado por dos cadenas de poli nucleótidos complementarios y dispuestos endoble hélices sus bases nitrogenadas son adenina, timina, citosina, guanina; carecen de uracilo. La complementación de bases se debe a la formación de enlaces tipo puente de hidrogeno.

La extracción de ADN de una muestra celular:

Se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Para esto tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

MATERIALES:

- Muestra vegetal (usamos pepinillo)

- Agua (destilada)

- Sal de mesa

- Bicarbonato sódico

- Detergente líquido o champú

- Alcohol al 96%

- Nevera

- Balanza analítica

- Colador o centrífuga

- Vaso

- Tubo de ensayo

- Varilla fina

- Pipeta asteur

METODOLOGIA

ᵜ Preparar el tampón con los siguientes ingredientes:

- 60 ml de agua destilada

- 0.75g de NaCl

- 2.5gde Bicarbonato Sódico

- 2.5ml de detergente liquido

ᵜ Cortar la muestra (pepinillo ) en pedazos pequeños y macerar con un poco de agua destilada fría en un mortero

ᵜ Colocar en un tubo limpio 5ml de la muestra triturada y añadir 10ml del tampón frio y agitar fuertemente durante 2 minutos

ᵜ Centrifugar los tubos durante 5 minutos a baja velocidad

ᵜ Retirar 5 ml del sobrenadante y colocar en otro tubo limpio

ᵜ Añadir 10ml de etanol absoluto frio

Nota: Al añadir el etanol hacerlo despacio por las paredes del tubo que debe estar inclinado

ᵜ Introducir una pipeta Pasteur hasta debajo de la separación entre el alcohol y el tampón y agitar suavemente de adelante hacia atrás durante un minuto

ᵜ Observar los fragmentos de ADN

¿Qué agentes físicos rompieron membranas celulares?

¿Qué agentes químicos rompieron membranas?

Resultados

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