Aislamiento de ADN.

Laboratorio N° 3

Aislamiento de ADN

Bastidas Yela Angela Eliana 1540552

Carabalí Ocampo Natalia 1539375

Cardona Bolivar Julieth Daniela 1536319

Cruz Mogollón Katherine 1537720

Universidad del Valle

Terapia Ocupacional

Santiago de Cali (Valle)

2016        

INTRODUCCIÓN

PROCEDIMIENTO.

1 EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE BAZO DE CERDO

1. Tome 25 ml de homogenizado de bazo de cerdo en solución salina regulada con citrato de sodio.  
2. Centrifugue la suspensión durante 5 minutos, transfiera el sobrenadante en un beaker y descarte el precipitado.
3. Agregue lentamente al  sobrenadante 20 ml de etanol frío y con la ayuda de una varilla enrolle suavemente las fibras de ADN

d. Trasfiera las fibras de ADN a 20 ml de solución salina 2M

Nuevamente centrifugue por 5 minutos, transfiera el sobrenadante y descarte el    precipitado.

e. Agregue al  sobrenadante lentamente 20 ml de etanol frío, espere que precipite el DNA y con cuidado transfiéralo a tubo de ensayo con 10 ml de solución salina 2M hasta el momento de su determinación con la difenilamina.

NOTA: Es importante que todo el proceso anterior se realice en hielo.

2 CUANTIFICACION DE LA CONCENTRACION DE ADN MEDIANTE EL METODO DE DIFENILAMINA

1. Preparación del reactivo difenilamina: 1 g de Difenilamina en 100 ml de ácido acético más 2.5 ml de ácido sulfúrico. Este reactivo debe prepararse en el momento de su uso.

b. Si se pretende un análisis cuantitativo se deben preparar diferentes patrones de desoxirribosa. Para llevar a cabo la determinación y concentración de ADN, prepare los siguientes tubos:

1. Caliente los tubos por 15 min en baño de agua hirviendo a 100 O C,  hasta la aparición de color azul que indica la presencia de ADN

Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 595 nm

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