Celulas Procariotas

DIVERSIDAD CELULAR I CELULAS PROCARIOTAS: TINCION Y OBSERVACIÓN

1ANIBAL POLO BETANCOURTH, 2KELLY SIERRA CONTRERAS

Universidad del Magdalena, 1Estudiante del Programa de Medicina, 2Estudiante del Programa de Psicología, Facultad de Salud. Carrera 32 No 22-08. Santa Marta, Colombia.

Kellyjohana.0717@gmail.com, anibal.polo1994@gmail.com.

RESUMEN

El objetivo de esta práctica fue observar algunas de las características de las bacterias (células procariotas) en medio de cultivos, aplicar técnicas de coloración para la examinación de microorganismos a través del microscopio y reconocer las diferentes formas y tamaños de las células procariotas.

Las células procariotas constan de un único compartimiento cerrado rodeado por la membrana plasmática, carecen de núcleo definido y tienen una organización interna bastante sencilla; son organismos unicelulares de los cuales las más comunes son las bacterias (Lodish, Berk, et al.2004)

En durante el laboratorio se realizó un frotis vaginal, se utilizó un cultivo de yogurt en y un frotis sobre el epitelio interno de la mejilla donde se quería determinar las bacterias que en ellos se pueden encontrar; en los dos últimos se utilizó la técnica de tinción simple y para el frotis se realizaron las dos técnicas de tinción(simple y diferencial), en donde se buscaba ver los Gram+ y Gram-, para lo que se utilizaron colorantes como azul de metileno, colorante de cristal violeta, etanol al 95%, aceite de inmersión, entre otros, con el fin de obtener la mejor visión de ellas; se adquirieron destrezas al usar los colorantes y realizar los procedimientos indicados por el docente.

Palabras Claves: células procariotas, procedimientos, técnicas, bacterias.

INTRODUCCION

En la actualidad se pueden encontrar células de una enorme variedad de tamaños y formas, que representan su adaptación evolutiva o a diferentes funciones especializadas dentro de un organismo (Dyson, 1975). El avance en el estudio de las células procariotas (dentro de la biología celular) ha ido de la mano con la mejora del microscopio y las técnicas de microscopía (Karp, 2011). Ya en 1676 Antonio Van Leeuwenhoek, un pulidor de lentes holandés, mezcló pimienta con agua y después de una o dos semanas observó una gota de esta infusión haciendo uso del microscopio simple, de este modo fueron descubiertas las bacterias, las cuales son importantes debido al papel que cumplen en el ámbito de la industria, la medicina, y la agricultura; la mayoría de las bacterias son unicelulares, sin embargo tienen la tendencia a la agregación. Morfológicamente (de acuerdo a su forma), las bacterias se pueden clasificar en: COCOS cuando tienen forma redondeada o esférica, BACILOS cuando tienen forma de bastón, ESPIRILOS en forma de espiral, VIBRIÓN cuando su estructura es análoga a la de una coma; cuando hay agregaciones se pueden denominar ESTREPTOCOCO si los cocos se disponen linealmente y ESTAFILOCOCOS si se agrupan en forma de racimos (Dyson, 1975). LAS TINCIONES para observar las bacterias se preparan en soluciones acuosas y orgánicas de colorantes que confieren una gran variedad de colores a los microorganismos y materiales biológicos, y permiten demostrar las funciones fisiológicas de estos (Carpenter, 1969). En este caso, el objetivo es observar algunas características de las bacterias que interactúan en bebidas lácteas, aplicar una técnica de coloración para estudiar la estructura de las bacterias y finalmente reconocer las diversas formas y tamaños de las células procariotas.

MATERIALES Y REACTIVOS

Los implementos que se utilizaron para esta práctica de laboratorio se han clasificado en tres grupos. 1) De laboratorio: asa microbiológica, caja de Petri, beaker, toallas de papel secante, aceite de inmersión, microscopio, portaobjetos, bata de laboratorio, guantes, goteadores y mechero. 2) Reactivos: Azul de metileno, solución colorante de cristal violeta, colorante de Gram. 3) otros: Kumis o yogurt, células bucales y vaginales, libreta de apuntes, guía de laboratorio y bolígrafo.

METODOS

Coloración simple:

Inicialmente se tomó un palillo de dientes y se hizo un frotis bucal. Luego se colocó la muestra en el portaobjetos, y se fijó pasándola por el mechero.

Después de preparar el frotis, se procedió a teñir la muestra mediante coloración simple. Para esto, se cubrió la preparación con 2 gotas de azul de metileno y se dejó 2 minutos. Luego se lavó con agua y se secó con papel filtro. Finalmente se observó la muestra en el microscopio óptico a distintas magnificaciones. Como resultado se observaron distintos tipos de bacterias en la muestra: cocos, bacilos y estreptococos, teñidos de un color azulado.

Coloración de Gram:

Se preparó un frotis vaginal y se colocó en un portaobjetos. Se cubrió la muestra con solución de cristal violeta y se dejó actuar durante 1 minuto, luego se lavó suavemente con agua. Después se cubrió la muestra con lugol, y se dejó actuar durante 1 minuto. Luego de lavarla con agua nuevamente, se agregó etanol a la muestra y dejó durante 30 segundos. Luego se aplicó a solución de safranina y se dejó durante 1 minuto. Después de lavar y secar, se observó la muestra con las distintas lentes de objetivo.

Como resultado de esta experiencia se observaron los distintos tipos de microorganismos teñidos de color azul o violeta en el caso de las bacterias Gram-positivas (bacterias con una pared celular gruesa), y de color rosado en el caso de las Gram-negativas.

RESULTADOS

A simple vista observamos desde el microscopio con una perspectiva de 100x las diferentes características del Yogurt, en el cual se notaron cocos, diplococos y estreptococos.

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En esta perspectiva de 100x observamos los siguientes resultados del frotis bucal con yogurt en el cual se encontraron cocos, bacilos y estreptococos, teñidos de un color azulado.

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En el frotis vaginal observamos muchas bacterias y células vaginales con núcleo definido, también se encontraron cocos, diplococos, bacilos, estafilococos y estreptococos, entre otras. En el cual también se diferenciaban células Gram positiva y Gram negativas.

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PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

1. ¿Por qué deben usarse coloraciones para observar a los microorganismos?

Porque los organismos son muy pequeños y transparentes. Para ello se utilizan colorantes como el azul de metileno, para así poder ver claramente a las células bacterianas.

2. ¿Para qué se usa la coloración de azul de metileno?

La coloración de azul de metileno se usa para observar bacterias y levaduras las cuales difieren desde el punto de vista químico de su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su alrededor.

El azul de metileno es una sustancia orgánica que se utiliza en el proceso de tinción de células para la observación por el microscopio.

Las propiedades de la pared celular de las bacterias les dan las llamadas propiedades tintoliales, siendo el azul de metileno un reactivo no específico (tiñe absolutamente todas las bacterias).

¿Según Gram como se dividen las bacterias?

Según Gram las bacterias se dividen en: Gram positivas, Gram negativas.

En microbiología, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que no se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de ahí el nombre de "Gram-negativas" o también "gramnegativas".

Esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, las otras son las bacterias Gram positivas.

3. ¿Por qué se debe enfriar el asa antes de usarla?

Porque debido a la temperatura se puede dañar la muestra, es decir se puede afectar a los microorganismos que se vayan a utilizar.

4. ¿Cómo se clasifican las bacterias según su forma?

Las Bacterias se clasifican por su forma en:

a)COCOS: Son de forma esférica.

b) BACILOS: Tienen forma de cilindros o de pequeños bastones.

c) ESPIRILOS. Son filamentos retorcidos en forma espiralada como untirabuzón.

d) VIBRIONES: Se asemejan a una coma.

Los COCOS suelen agruparse y formar estructuras con aspecto de cadenas (ESTREPTOCOCOS) o de racimos (ESTAFILOCOCOS) o cuando se agrupan de a dos (DIPLOCOCOS) o de a tres (TREPTOCOCOS).

Diplococo: cocos en grupos de dos

Tetracoco: cocos en grupos de cuatro

Estreptococo: cocos en cadenas

Estafilococo: cocos en agrupaciones irregulares o en racimo

Bacilo: en forma de bastoncillo

Formas helicoidales

Espiroqueta: en forma de tirabuzón (helicoidal flexible).

6. ¿Por qué se dice que la coloración con azul de metileno es una coloración simple y directa y con Gram es una coloración

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