Cuantificación tradicional Método sencillo para cuantificar el número de bacterias viables en el esputo

[pic 1]  UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN[pic 2]

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Tópicos En El Diagnostico
Microbiológico    

“Seminario”

Cuantificación tradicional    

Método sencillo para cuantificar el número de bacterias viables en el esputo

Responsables:

Dr. José Ángel Merino

Dr. Eduardo Franco

Alumno:

Isidro Adrián Moreno López

1652274    Grupo: 431

10/03/17

 Método sencillo para cuantificar el número de bacterias viables en el esputo

Los pacientes con enfermedades pulmonares crónicas como bronquiectasias, bronquitis crónica, quística y  fibrosis producen regularmente esputo, de los cuales una variedad de especies bacterianas se han aislado, incluyendo Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Branhamella catarrhalis, Pseudomonas aeruginosa, y Staphylococcus aureus. El aislamiento de muchas de estas bacterias se ha mejorado con el uso de medios selectivos. Generalmente los resultados del cultivo de esputo son a menudo poco fiables. Por otra parte, simplemente observando la presencia o ausencia de una especie bacteriana puede ser engañosa. Muchas de las técnicas de cultivo de esputo actual se basan en las observaciones publicadas en la década de 1950 por lo cual es evidente que las técnicas de cultivo de esputo requieren una re-evaluación.

Todas las muestras de esputo fueron de pacientes clínicamente estables con Bronquiectasias confirmadas, se realizó una evaluación macroscópica de las muestras de esputo recolectadas clasificándolas como: Mucoides (M), Mucopurulento (MP), Purulento (P), un total de 6 muestras de casa clasificación las cuales se pesaron para proseguir con una división en 4 partes alícuotas iguales. Muestras de esputo se homogeneizaron con ayuda de un vortex y se utilizaron diferentes sustancias para su homogenización (Ditiotreitol, Sputasol, Solución salina estéril) en algunas de esta se usaron perlas de vidrio.

Se utilizaron las diluciones de  ,  y para inocular placas de agar en medios: chocolate, sangre y MacConkey. Todas las placas se incubaron a 36°C en una atmósfera de 5% de CO2 en aire y se examinó el crecimiento bacteriano después de 24 y 48 Horas. Las placas que produjeron entre 30 y 300 colonias se contaron usando un conteo manual y el número viable la presencia bacteriana se expresó como unidades formadores de colonias por mililitro (UFC / ml) de esputo inicial. En estas placas todos los microorganismos patógenos potenciales podían ser fácilmente identificados. Se inocularon mediante asas bacteriológicas (calibradas) o una pipeta de precisión para determinar qué método dio lugar a menor variación. Se usó volumen de muestra 10 uL (0.01 mL) dispensado por pipeta de precisión la cual se  extendió con una asa  la cual  lugar a la menor variación entre las placas y  una distribución uniforme colonias bacterianas. Los números de bacterias viables recuperadas de diferentes alícuotas de muestras individuales de esputo fueron generalmente de misma magnitud.[pic 3][pic 4][pic 5]

Este método representa una relativamente rápida y sencilla técnica para cuantificar con precisión bacterias viables presentes en las muestras de esputo. El uso de una pequeña parte de la muestra  parece ser representante de la muestra en su conjunto. El crecimiento de colonias  sobre placas de agar inoculadas con esputo diluido mejoro la identificación de todos los patógenos potenciales en la muestra. El uso de esta técnica podrá  ayuda al seguimiento de los efectos de la terapia con antibióticos, en las exacerbaciones infecciosas agudas, y en la progresión de las enfermedades pulmonares crónicas tales como bronquiectasias, bronquitis crónica, quística y fibrosis.

...