Cuestionario herramientas enzimologicas

1. ¿Qué aplicaciones tiene la DNAsa?

Se utiliza en la identificación de regiones de ADN que están unidas a proteínas y por tanto protegidas de la digestión de DNAsa I, también se utiliza para identificar las regiones de transcripción activas de la cromatina debido a que estas son mas susceptibles de digestión por la DNAsa.

1. ¿Cómo funciona la transcriptasa reversa?

Su función es sintetizar ADN de doble cadena utilizando un ADN monocatenario como molde es decir cataliza la retrotranscripcion.

1. ¿Qué es la actividad estrella?

Es la actividad que presentan algunas enzimas tipo II en condiciones no optimas (pH, fuerza iónica, presencia de contaminantes), caracterizada por un descenso en la especificidad del sitio de reconocimiento.

1. ¿Cuál es el mecanismo de acción de las enzimas de restricción?

Un enzima de restricción (o endonucleasas de restricción) es aquella que puede reconocer una secuencia concreta de nucleótidos en una molécula de ADN y cortarla en ese punto preciso, llamado sitio o diana de restricción. En ocasiones, el enzima reconoce una secuencia concreta, pero no corta en ese sitio, sino en otro más alejado. Las secuencias de restricción restringen, por tanto, la actividad del enzima a esas secuencias, que no corta en otras. Los sitios de restricción cuentan con entre 4 y 12 pares de bases, cuya secuencia es reconocida por el enzima. Evidentemente, cuanto más larga sea la secuencia de reconocimiento, menos probable es que una molécula de ADN la posea. Por esta razón, los enzimas que reconocen 4 letras del ADN cortan con más frecuencia que los que reconocen 6 u 8 letras, o más.

1. ¿Qué consideraciones se deben de tomar en cuenta en una reacción de restricción?

• Enzimas que generan extremos romos (parejos)
• Enzimas que generan extremos cohesivos (desparejos)
• Pureza del DNA
• Temperatura y Ph
• DNAsas
• Contaminantes con carga (-)
• Grados de metilación

1. ¿Cómo funciona la ADN polimerasa?

Pol. I: síntesis en dirección 5 a 3, actividad exonucleasa de 3 a 5 para remo visión de nucleótidos erróneos y actividad exonucleasa de 5 a 3 sintetizando porción de DNA removiendo la existente.
Pol. II: actividad exonucleasa 3 a 5 procesos de reparación.
Pol. III: realiza proceso replicativo, su función es síntesis de ADN.

1. ¿Cuál es el fundamento de la PCR?

Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas nuevamente.

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