Curvas Estándar y Concentración
Enviado por KarollMtz • 20 de Octubre de 2018 • Prácticas o problemas • 611 Palabras (3 Páginas) • 189 Visitas
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Curvas Estándar y Concentración
Una curva estándar o curva patrón es una curva de referencia construida por cantidades conocidas de una determinada sustancia (ej. mg) que se utiliza para determinar la cantidad de esa misma sustancia presente en una alícuota. Tiene dos aplicaciones:
- Conocer la confiabilidad de nuestras mediciones
- Utilizarla como referencia para interpolar valores de nuevas determinaciones
Objetivos:
- Aprender a realizar y utilizar curvas estándar para determinar concentraciones específicas de soluciones desconocidas
- Conocer y utilizar las diferentes formas de calcular concentraciones
Materiales:
- Micropipeta de 1 ml o jeringa de insulina
- Espectrofotómetro y celdas de 1ml
- 11 Tubos de ensaye
- Gradilla
- Vortex
Reactivos (por grupo):
- 1.5 mL de solución de albúmina sérica bobina 0.2 mg/ml
- 0.5 mL de solución A (proteína de concentración desconocida)
- 1 mL de solución B (proteína de concentración desconocida)
- 50 mL de Reactivo Bradford (guardar en frasco ámbar)
Método:
Curva de Proteína por el método de Bradford
- Preparar los siguientes tubos. Para la curva estándar (tubos 1 al 6) se utiliza una solución de 0.2 mg / ml de albúmina sérica bobina (BSA). Para los tubos problema (7 al 10) se utilizan las soluciones de concentración desconocida (A y B).
Tubo | µl de BSA | µg de BSA | µl de H2O | A595 |
1 | 0 µl | 0 µl | 0 µl | |
2 | 25 µl | 5 µl | 75µl | |
3 | 50 µl | 10 µl | 50 µl | |
4 | 75 µl | 15 µl | 25 µl | |
5 | 100 µl | 20 µl | 0 µl |
Tubo | µl de Sol. Problema | µg Prot | µl de H2O | A595 |
7 | Problema A 10 µl | ¿? | 90 µl | |
8 | Problema A 15 µl | ¿? | 85 µl | |
9 | Problema B 30 µl | ¿? | 70 µl | |
10 | Problema B 60 µl | ¿? | 40 µl |
- Mezclar bien todos los tubos
- Adicionar a cada tubo 1ml de reactivo Bradford y mezclar inmediatamente
- Esperar al menos 5 minutos pero menos de 1 hora
- Leer la A595 y anotar los datos
- Eliminar los desechos de reactivo Bradford en el contenedor designado para ello
- Lo que sobre de las solución patrón de albúmina y de las soluciones problema A y B se puede volver a congelar para que otros grupos puedan utilizarlas.
Análisis de datos:
- Calcular los µg de albúmina que corresponden a las cantidades utilizadas en cada tubo de la curva estándar
- Graficar la curva estándar (µg de proteína en el eje X y A540 en el Y) y obtener la ecuación de la recta.
- Calcular la cantidad de proteína en las muestras problema (tubos 7, 8, 9 y 10).
- Calcular la concentración de proteína en las soluciones problema (A y B).
- Completar la siguiente tabla
Tubo | ml sol A | ml sol B | mg Proteína | mg Proteína/ml |
7 | --- | |||
8 | --- | |||
9 | --- | |||
10 | --- |
¿Cuál es la concentración de proteína en la sol A? ¿y en la B?
**Nota: el reporte debe incluir todos los cálculos, tanto del análisis de resultados como del cuestionario.
Cuestionario:
- Definir los siguientes conceptos: Concentración, mol, molaridad, porcentaje (como forma de medir concentración), número de Avogadro)
- ¿Cuál es la diferencia entre un mol y uno molar?
- ¿Qué significa que una solución esté a una concentración 2M? ¿y 2% w/v?
- Completar la siguiente tabla con las equivalencias correspondientes:
M | mM | μM | nM | pM | |
1M = | 1 | ||||
1mM = | 1 | ||||
1μM = | 1 | ||||
1nM = | 1 | ||||
1pM = | 1 |
- ¿Para qué sirve una curva estándar?
- Si tienes una solución de glucosa 1M y la diluyes1:2
- ¿A qué molaridad queda?
- Si diluyes 1:3 la dilución anterior ¿A qué dilución final queda?
- ¿Qué molaridad tiene esta última solución?
- ¿Cuál es la concentración final en %?
- ¿Cuántos gramos debes pesar para preparar 250ml de (NH4)SO4 (sulfato de amonio) 2M? ¿A cuánto equivale en %?
- ¿Cuánto debes pesar para preparar 50ml de HCl 0.4%? ¿A qué molaridad queda?
- Calcule la molaridad de una solución que contiene 26g de fructosa (C6H12O6) diluidos en 300ml de H2O ¿y a qué porcentaje queda?
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