Detección De Coliformes En Laboratorio

OBJETIVO:

Determinar la calidad microbiológica de un alimento, mediante la técnica de cuenta de organismos coliformes.

RECOMENDACIONES:

Antes de iniciar la práctica se recomienda la lectura de:

• NOM-110-SSA1-1994. PREPARACIÓN Y DILUCIÓN DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO.

• NOM-113-SSA1-1994. MÉTODO PARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA.

FUNDAMENTO:

En este grupo de microorganismos se incluyen bacilos Gram negativos, no esporulados, fermentadores de lactosa, productores de gas dentro de 48 horas cuando se incuban de 32°C a 35°C. Estas bacterias se encuentran en forma abundante y constante en la materia fecal del hombre y animales superiores; así mismo, ciertas bacterias de este grupo son propias del suelo y también se pueden encontrar en varios alimentos como son: carne, vegetales, leche pasteurizada, etc.

La interpretación de la presencia y abundancia de los organismos coliformes no tiene un carácter universal. En tanto que el agua, en términos generales, se considera que su presencia revela una exposición reciente de contaminación fecal. Su significado no es el mismo en el caso de la leche, sustrato en el cual son capaces de desarrollarse muy activamente.

En algunos tipos de quesos, numero elevado de estos microorganismos no guardan necesariamente relación con los antecedentes de manejo higiénico del producto y su presencia carece de significado sanitario.

La demostración y recuento de organismos coliformes puede realizarse mediante el empleo de medios de cultivo sólidos, que los favorecen selectivamente y los diferencia de los microorganismos con los que suele encontrarse asociados en alimentos, o bien recurriendo a tubos de fermentación conteniendo Caldo Lactosado o Caldo Lauril-Sulfato de Sodio Triptosa y computando su numero con base en las tablas de numero mas probable (N.M.P.).

Con el propósito de correlacionar mas estrechamente un grado de riesgo a la salud, con el hallazgo de algún grupo de microorganismos en el laboratorio, se ha logrado disponer de una técnica que permite, con razonable seguridad, diferenciar los organismos coliformes fecales de los restantes que incluye el grupo genérico. Al practicar la prueba es indispensable un estricto control de temperatura con el fin de evitar falsos positivos o negativos.

A) Organismos Coliformes Totales por cuenta en placa

MATERIAL:

• 3 Placas de Petri*

• 3 Pipetas de 1 ml*

• 1 Pipeta de 10 ml.*

• 1 Frasco de dilución con 90 ml. de Buffer de Fosfatos, pH 7.2

• 2 Tubos de ensaye con 9 ml. de Buffer de Fosfatos

• Agar Rojo Violeta Bilis

• Equipo básico usado en microbiología

PROCEDIMIENTO:

• Preparar la muestra y sus diluciones como se indica en el ESQUEMA DE TRABAJO.

• Transferir 1 ml. de la muestra y sus diluciones a placas de Petri y agregar 15 ml. de medio de cultivo Agar Rojo Violeta Bilis fundido y templado a 45°C.

• Mezclar perfectamente el inóculo y el medio de cultivo, dejar solidificar. Sobre la superficie del medio firme, depositar 4 ml. del mismo medio de cultivo, extendiéndolo para cubrir completamente la superficie.

• Dejar solidificar e incubar las placas en posición invertida durante 24 horas a 35 °C. Contar las colonias de coliformes desarrolladas.

• Las colonias de color rojo oscuro, con diámetro de 0.5 mm. O mayor, con halo de precipitación, se consideran típicas de organismos coliformes en productos lácteos. En otros productos puede no mostrar el halo.

• Estimar el numero de organismos coliformes por ml. o por gramo de muestra y reportar como

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