Endotelio Y Sepsis V. TOMICIC FLORESa Y J. GUERRERO PERALTAa,b AUnidad De Cuidados Intensivos. Clínica Alemana De Santiago. Santiago De Chile. Chile. BUnidad De Cuidados Intensivos. Hospital Clínico Universidad De Chile. Santiago De Chile. Chile.
Enviado por • 8 de Mayo de 2014 • 4.402 Palabras (18 Páginas) • 496 Visitas
El concepto actual de la función endotelial en
condiciones normales y de inflamación ha cambiado
radicalmente desde los tiempos en que era
considerado como una mera barrera entre el espacio
intra y extravascular. En condiciones normales,
el endotelio tiene un importante papel anticoagulante,
antiadhesivo para los leucocitos y
de regulación del tono vascular. En condiciones
de inflamación, el fenotipo endotelial cambia a
uno procoagulante, proadhesivo, y proinflamatorio.
El endotelio vascular es un tipo celular central
en la orquestación de la respuesta inflamatoria.
PALABRAS CLAVE: sepsis, disfunción endotelial, respuesta
inflamatoria, óxido nítrico.
ENDOTHELIUM AND SEPSIS
The current concept of the endothelial function
in normal condition and in inflammatory states
has changed radically since the time in which
it was regarded as a simple barrier between intravascular
and extravascular compartments.
Under normal conditions, the endothelium plays
an important role as anticoagulant, as antiadhesive
for leukocytes, and as a modulator of the
vascular tone. In conditions of inflammation, the
endothelial phenotype changes to a pro-coagulant,
pro-adhesive, and pro-inflammatory one.
Vascular endothelium is a key cellular type in assembling
the inflammatory response.
KEY WORDS: sepsis, endothelial dysfunction, inflammatory
response, nitric oxide.
INTRODUCCIÓN
Durante muchos años el endotelio fue considerado
una barrera inerte que separaba el torrente circulatorio
de los tejidos subyacentes. Los avances en la comprensión
de los procesos involucrados en la respuesta del
huésped a la lesión han permitido reconocer a esta población
celular como un órgano verdadero que ocupa
un lugar fundamental en el montaje de dicha respuesta.
Ampliamente distribuidas en el cuerpo humano,
las células endoteliales tapizan el compartimiento
vascular que alcanza una superficie de 4.000 a 7.000
m2 y cumplen múltiples funciones donde destacan:
regulación del tono vasomotor, balance local de mediadores
pro y antiinflamatorios, regulación del desplazamiento
de células y nutrientes, mantenimiento
de la fluidez sanguínea y generación de neovasos1.
En la sepsis se produce una activación endotelial
masiva, exagerada y sostenida que se caracteriza por
desequilibrio entre mediadores pro y antiinflamatorios
y pérdida del tono vasomotor. En este caso la
respuesta es "desadaptada" (disfunción endotelial) y
puede acabar con la vida del individuo afectado. El
término disfunción endotelial se relaciona con ambos
tipos de respuesta (local o sistémica) y se refiere
principalmente a aquellos casos en que la respuesta
endotelial implica, de una u otra manera, un coste
para el huésped2.
En este capítulo nos referiremos a 4 aspectos de la
activación endotelial: a) activación de la célula endotelial
como respuesta adaptativa normal; b) disfunción
endotelial en la sepsis; c) daño endotelial e insulto hipóxico/
isquémico, y d) endotelio y regulación del
tono vasomotor (unidad reguladora mioendotelial).
ACTIVACIÓN DE LA CÉLULA
ENDOTELIAL COMO RESPUESTA
ADAPTATIVA NORMAL
En condiciones normales las células endoteliales
se encuentran continuamente reconociendo y res-
Endotelio y sepsis
V. TOMICIC FLORESa Y J. GUERRERO PERALTAa,b
aUnidad de Cuidados Intensivos. Clínica Alemana de Santiago. Santiago de Chile. Chile.
bUnidad de Cuidados Intensivos. Hospital Clínico Universidad de Chile. Santiago de Chile. Chile.
Correspondencia: Dr. V. Tomicic.
Unidad de Cuidados Intensivos.
Clínica Alemana de Santiago.
Avda. Vitacura 5961. Vitacura. Santiago de Chile.
Correo electrónico: vinkotomicic@hotmail.com
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pondiendo en forma activa frente a los cambios que
ocurren en el ambiente extracelular local, como sucede
en presencia de bacteremia, trauma, isquemiareperfusión,
etc. En otras palabras, la activación de
la célula endotelial se produce como respuesta adaptativa
normal y la forma de presentación y duración
de ésta dependerá del tipo de estímulo, sitio donde
se desarrolla y momento en que ocurre su activación
dentro del sistema circulatorio. Este concepto temporoespacial
de la activación endotelial se ha denominado
"heterogenicidad endotelial" o "diversidad
vascular". Cabe destacar además que la respuesta endotelial
no es un fenómeno del "todo o nada" (onoff),
sino que representa un espectro amplio que depende
del estado de salud o enfermedad del huésped1.
Así, cuando la respuesta endotelial beneficia al
organismo en cuestión, ésta puede ser considerada
adaptativa y fisiológica, como ocurre en la invasión
local por un patógeno. En este caso, la liberación de
mediadores inflamatorios, marginación de leucocitos
y activación de la coagulación cumplen la función
de rodear la infección e impedir que ésta se distribuya
ampliamente en el resto del organismo.
Transducción de la señal inducida
por lipopolisacáridos
El lipopolisacárido (LPS) es el responsable de la
iniciación de la cascada inflamatoria en las infecciones
producidas por bacterias gramnegativas. Su actividad
biológica es mediada por una glucoproteína
de fase aguda de síntesis hepática que posee alta afinidad
para LPS, denominada proteína de enlace de
LPS (LBP). La importancia de esta última en la activación
de la sepsis ha quedado demostrada por la
menor sensibilidad a LPS observada en ratas carentes
del gen de LBP.
La LBP forma un complejo con LPS (LPS-LBP)
y funciona como una proteína de transferencia que
acarrea LPS hacia receptores ubicados en la superficie
celular. El complejo LPS-LBP ejerce su actividad
al entregar LPS a un receptor de membrana específico
denominado mCD14 que se encuentra en la
superficie de macrófagos, monocitos y neutrófilos.
Existen resultados contradictorios con respecto a
la expresión de este receptor en la superficie de las
células endoteliales; sin embargo, algunos autores
han logrado estimular células endoteliales mCD14
negativas. En ausencia de mCD14, LPS puede actuar
sobre las células endoteliales por medio de la
forma soluble de este receptor (sCD14). Este último
es liberado a la circulación desde los monocitos activados
y es capaz de actuar como mediador de la actividad
de LPS en una forma LBP-dependiente similar
a mCD143.
Ambas formas de CD14 se comportan como moléculas
de reconocimiento que interactúan no sólo
con LPS, sino también con otros componentes microbianos
como peptidoglicano soluble y ácido lipoteicoico.
El mCD14, al carecer de dominio intracelular, es
incapaz de iniciar por sí mismo una respuesta celular,
razón por la cual debe acompañarse de proteínas
transmembrana. Entre éstas destacan los receptores
toll-like (TLR) identificados como indispensables
para inducir la activación de mediadores intracelulares
tales como proteínas quinasas y factor nuclear
kappa-B (NF-κB).
La célula endotelial expresa predominantemente
dos tipos de TLR, TLR-4 y TLR-2. Ambos son regulados
por factores relacionados con la inflamación,
entre ellos LPS, factor de necrosis tumoral-α
(TNF-α) e interferón-γ (IFNγ).
En los mamíferos, el TLR-4 es probablemente la
proteína transmembrana más importante involucrada
en la transmisión de la señal inducida por LPS; no
obstante, es necesario mencionar que se han identificado
otros tipos de proteínas como el fMLP, que se
comportan de manera similar.
Recientemente en una variedad de ratas resistentes
a LPS (C3H/HeJ y C57BL/10ScCr) se demostró
que la mutación del gen para TLR-4 les confería resistencia
a los efectos de la endotoxina bacteriana.
Sorprendentemente, esta anomalía no pudo ser corregida
por transfección de sus líneas celulares con
receptores TLR-4 lo que hizo plantear la existencia
de moléculas adicionales.
TLR-4 para ejercer su acción requiere la presencia
de una glucoproteína accesoria denominada MD-2,
ésta se une al dominio extracelular de TLR-4 otorgándole
mayor capacidad de respuesta frente a LPS.
Probablemente cada miembro de la familia de TLR
necesita una proteína accesoria específica para reconocer
los diferentes componentes bacterianos3.
Factor de transcripción NF-κB
Los efectos proinflamatorios del LPS se cree que
están mediados por activación del NF-κB que se encuentra
presente tanto en células mieloides (monocito-
macrófago, polimorfonucleares [PMN]) como en
células endoteliales. Este factor desempeña un papel
central en la regulación de la transcripción de citocinas,
moléculas de adhesión y otros mediadores que
dependerán del tipo de célula estimulada.
El NF-κB forma parte de una familia de proteínas
estructuralmente relacionadas que contienen una región
aminoterminal denominada dominio homólogo
Rel (RDH), donde se encuentra el dominio de dimerización
y la señal de localización nuclear (NLS).
Cuando la célula se encuentra en estado quiescente,
en el citoplasma celular NF-κB, heterodímero
constituido por las subunidades p50 (NF-κB1) y p65
(RelA), se encuentra unido a una proteína inhibidora
conocida como IκB que enmascara la NLS4.
Mediadores intracelulares y activación
del NF-κB
Como se mencionó, el NF-κB unido al IκB permanece
en el citoplasma como un factor de transcripción
latente. La liberación del NF-κB se consigue
a través de la fosforilación y degradación proteolíti-
ca del IκB en el citoplasma, proceso que puede ocurrir
en respuesta a una amplia gama de estímulos tales
como TNF-α, interleucina 1B (IL-1ß), LPS,
ARN doble hebra, especies reactivas de oxígeno
(ERO), radiación gamma, etc.
El IκB está constituido por dos subunidades inhibidoras
(IκBα e IκBß). Ambas son susceptibles de
ser fosforiladas y esto ocurre a nivel de residuos de
serina específicos ubicados en su extremo aminoterminal
(Ser32, Ser36). Este proceso se inicia con la
activación de dos quinasas de IκB (IKKα e IKKß),
también conocidas como IKK-1 e IKK-2, en respuesta
a los estímulos antes citados.
Luego, las quinasas de IκB forman homo y heterodímeros
que se unen a una tercera proteína conocida
como modulador esencial de NF-κB (NEMO).
Este complejo formado por IKK-1, IKK-2 y NEMO
pasa a formar parte, junto a otras proteínas, de una
estructura de alto peso molecular denominada IKK
signalosoma, capaz de acoplarse a otras quinasas
activadoras corriente arriba, entre ellas, proteínas
quinasa-quinasa-quinasa activadas por mitógenos
(MAP3K), quinasa inductora de NF-κB (NIK) y
quinasa quinasa-1 reguladora de la señal extracelular
(MEKK-1).
A su vez, para que estas quinasas corriente arriba
continúen con el proceso de fosforilación de IκB,
requieren interactuar directamente con diferentes
factores que se encuentran asociados a los receptores
de TNF-α e IL-1. Estos factores forman parte de
complejos de señal citoplasmática receptor-específicos,
entre los que destacan TRAF1, TRAF2, receptor
de TNF 1-asociado al dominio proteico de muerte
(TRADD) y TRAF6 donde TRADD se encuentra
asociado con receptores de TNF-α y TRAF6 con los
de IL-15.
Un ejemplo de ello, es la capacidad que tiene
NIK para unirse directamente con TRAF2 e iniciar
la activación del NF-κB. Aunque no existe consenso,
parece que la sobreexpresión de NIK y MEKK-1
conducen a la fosforilación de IKK-1 e IKK-2, donde
NIK expresa preferencia por IKK-1 y MEKK-1
por IKK-24.
Una vez concluida la fosforilación de IκB, éste es
ubiquitinado por la ubiquitina ligasa E3, miembro
terminal de una cascada de enzimas conjugantes de
ubiquitina, para luego ser degradado por el proteasoma
26S. En ese momento el heterodímero p50-p65
libre es translocado al núcleo, donde se une a secuencias
κB en regiones promotoras de genes específicos
que codifican mediadores activados transcripcionalmente
por este factor. En el caso de las
células endoteliales los principales mediadores serán
moléculas de adhesión, tales como E-selectina, moléculas
de adhesión intracelular (ICAM-1) y molécula
de adhesión intercelular (VCAM-1)4 (fig. 1).
DISFUNCIÓN ENDOTELIAL EN LA SEPSIS
El compromiso de la función endotelial forma
parte de la respuesta multicelular integrada que el
huésped es capaz de montar frente a un patógeno
agresor. Esta disfunción puede culminar en una alteración
grave de la homeostasis vascular que se caracteriza
por oclusión microvascular de magnitud
variable que puede llevar a un desequilibrio entre la
oferta y demanda de oxígeno a nivel tisular6.
En la sepsis, la célula endotelial cambia desde un
fenotipo quiescente (anticoagulante, antiadhesivo,
vasodilatador) a uno activado (procoagulante, proadhesivo,
vasoconstrictor) donde ocurren cambios
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Figura 1. Mediadores intracelulares y activación del factor nuclear kappa-B (NF-κB). TNF: factor de necrosis tumoral;
TRADD: receptor de TNF1 asociado al dominio proteico de muerte.
estructurales y funcionales que la caracterizan (tabla
1). Tanto las células endoteliales como los monocitos
participan en la activación paralela de las
cascadas de inflamación y coagulación que tendrán
como fin eliminar el agente patógeno. Sin embargo,
simultáneamente esta respuesta puede generar daño
colateral en tejidos normales que puede contribuir
al desarrollo de disfunciones de órganos cuya consecuencia
será un aumento de la morbimortalidad
en este tipo de pacientes7.
En condiciones normales, la actividad biológica
de los mediadores involucrados en la respuesta inflamatoria
está sometida a un estricto control por
parte de inhibidores específicos. En el paciente séptico,
en cambio, este balance se encuentra deteriorado
y se manifiesta a través de cambios considerables
en las tasas de producción de los distintos mediadores
con el desarrollo de un estado de desequilibrio
entre pro y antiinflamación8 (fig. 2).
A continuación haremos una breve descripción de
las características más importantes que adquiere la
célula endotelial en su estado activado: a) propiedades
procoagulantes; b) propiedades proadhesivas; c)
pérdida de la función de barrera, y d) apoptosis de la
célula endotelial
Propiedades procoagulantes
Los mediadores inflamatorios liberados durante
la respuesta inflamatoria pueden interactuar con las
células endoteliales e inducir en ellas un fenotipo
procoagulante. Estudios in vitro han demostrado que
estas células disminuyen la síntesis de trombomodulina,
activador del plasminógeno tisular y heparán
sulfato. Al mismo tiempo ocurre un aumento de la
expresión del factor tisular, del inhibidor del activador
del plasminógeno 1 (PAI-1) e incremento en la
generación de micropartículas fosfolipídicas procoagulantes
que contribuyen al daño celular.
El aumento en la expresión del factor tisular en la
superficie de monocitos circulantes y macrófagos tisulares
lleva a la activación de la vía extrínseca de la
cascada de coagulación, generación de trombina,
formación de fibrina y su posterior amplificación
por la vía intrínseca de la coagulación. La activación
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Estructurales Funcionales
Vacuolización del núcleo Cambio balance hemostático
Edema del citoplasma ↑ adhesión celular y tráfico
leucocitos
Fragmentación del citoplasma Alteración tono vasomotor
Denudación Pérdida función barrera
Despegamiento Muerte celular programada
TABLA 1. Características del fenotipo activado
de las células endoteliales
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Figura 2. Respuesta endotelial a la
agresión. Modificada de Ten V, Pinsky
D13. AMPc: 3’, 5’-adenosin monofosfato
cíclico; PAI-1: inhibidor del activador
del plasminógeno 1; ICAM: moléculas
de adhesión intracelular; VCAM:
moléculas de adhesión intercelular;
ERO: especies reactivas de oxígeno.
de esta última incrementa la producción de citocinas
y quimioquinas por parte de las células endoteliales y
aumenta la expresión de moléculas de adhesión. Se
ha propuesto además que la fibrina, al inmovilizar
los patógenos en la superficie de los leucocitos, facilitaría
su fagocitosis.
Factores hemodinámicos, tales como la reducción
del gasto cardíaco y la vasoconstricción asociados a
lesiones vasculares oclusivas, pueden favorecer la
formación local de coágulos debido a una reducción
en la remoción de serinas proteasas activadas. En
estas circunstancias la respuesta inflamatoria se amplifica,
ya que estas enzimas son responsables de activar
sustratos corriente abajo en la cascada de la
coagulación e interactuar con receptores de membrana
de monocitos y células endoteliales.
Se ha demostrado que junto con la activación de
la vía extrínseca de la coagulación ocurre una marcada
disminución de la actividad anticoagulante natural
(proteína C, antitrombina III y trombomodulina) favoreciendo
el perfil procoagulante del estado séptico.
Estudios clínicos han puesto en evidencia que la activación
de la coagulación, el depósito difuso de fibrina
intravascular y la inhibición de la fibrinólisis estarían
relacionados también con el desarrollo de
disfunción de órganos y con aumento de la mortalidad.
Además, hay datos consistentes para afirmar
que las propiedades procoagulantes descritas durante
la sepsis no son homogéneas en los distintos órganos
y tejidos analizados, planteando así que la respuesta
del endotelio en los diferentes lechos vasculares está
sometida a un tipo especial de regulación9,10.
Propiedades proadhesivas
Frente a los mediadores inflamatorios el endotelio
responde expresando en su superficie moléculas de
adhesión tales como P-selectina (CD62P), E-selectina
(CD62E), ICAM-1 (CD54), VCAM-1 (CD106),
PECAM-1 y CD99. Todas ellas en conjunto favorecerán
el tráfico de leucocitos desde el torrente circulatorio
al tejido subyacente, principalmente en el territorio
precapilar y en los capilares de órganos
nobles como corazón y pulmón. Además, el endotelio
aumenta el reclutamiento de plaquetas en la pared
de los vasos a través de un mecanismo dependiente
de GPIIb/IIIa. Cabe destacar que ninguna de estas
observaciones ocurre de manera generalizada, sino
más bien como eventos localizados en ciertos órganos
y/o segmentos vasculares3 (fig. 3).
Pérdida de la función de barrera
En la sepsis la redistribución de fluidos al espacio
extravascular se ve favorecida por el incremento de
la permeabilidad endotelial o pérdida de la función
de barrera. Datos experimentales sugieren que este
aumento de la permeabilidad es mediado por LPS y
se relaciona con la escisión enzimática de proteínas
que forman parte de las uniones intercelulares, dando
como resultado daño estructural de la célula endotelial.
Estudios in vivo e in vitro han demostrado
que el TNF-α es uno de los responsables de este
trastorno y que esta actividad podría verse potenciada
por trombina3.
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Figura 3. Sepsis y tráfico de leucocitos. Modificada de Peters K, et al3. LPS: lipopolisacárido; LBP: proteína de enlace de
LPS; TLR: receptores toll-like; NF-κB: factor kappa B; IL-1B: interleucina 1B; TNF-α: factor de necrosis tumoral alfa;
ICAM-1: moléculas de adhesión intracelular; VCAM-1: moléculas de adhesión intercelular.
Apoptosis de las células endoteliales
En condiciones normales un porcentaje muy bajo
de las células endoteliales (< 0,1%) experimenta
muerte celular programada (apoptosis) sugiriendo
que éste es un proceso con alto grado de regulación.
En forma experimental se ha demostrado que tanto
agentes patógenos, endotoxina, citocinas proinflamatorias,
ERO y condiciones de isquemia/reperfusión
son capaces de inducir apoptosis a través de upregulation
de proteínas claves en dicho proceso
tales como el homólogo de Bcl-2, A1, A20 y proteínas
con dedos de zinc.
Las células endoteliales en apoptosis aumentan la
respuesta inflamatoria al favorecer la acción paracrina
de citocinas proinflamatorias sobre la inducción
de ICAM-1, VCAM-1, ERO, actividad procoagulante
y activación del complemento.
La importancia de la muerte celular por apoptosis,
que sufren tanto células endoteliales como linfocitos
y células epiteliales del tubo digestivo, ocupa
un lugar central en la patogenia de la sepsis severa/
shock séptico y ha sido demostrada en necropsias de
pacientes fallecidos por disfunción multiorgánica11.
DAÑO ENDOTELIAL E INSULTO
HIPÓXICO/ISQUÉMICO
La presencia de oxígeno es obligatoria para la supervivencia
de la célula eucariota, ya que la respiración
mitocondrial es más eficiente que la glucólisis
anaeróbica en la generación de energía a partir de
glucosa. Las células endoteliales, comparadas con
otros tipos celulares como miocardiocitos, neuronas
y células del túbulo renal, son más resistentes a la
disminución del contenido de oxígeno en el medio,
tolerancia que posiblemente proviene de la exposición
frecuente de éstas a niveles reducidos de oxígeno
como sucede en la arteria pulmonar y tejidos en
cicatrización. Al parecer, esta resistencia a la hipoxia
tiene relación además con la activación de proteínas
antiapoptóticas que van en paralelo con la magnitud
del insulto más que con la naturaleza de éste.
La respuesta de la célula endotelial a la hipoxia
involucra mecanismos dirigidos a conservar la
energía como down-regulation de las funciones que
poseen altos requerimientos energéticos (transporte
de iones) e implementación de vías alternativas
para la síntesis de adenosina trifosfato (ATP) a través
de la inducción de enzimas glucolíticas que optimizan
la utilización de sustratos. Gran parte de
este proceso adaptativo es regulado a nivel de la
transcripción de genes que se encuentran involucrados
en la respuesta a la privación de oxígeno.
Durante la organización de la respuesta celular a
la hipoxia son activados factores transcripcionales
tales como el complejo activador de proteína-1 (AP-1),
factor de crecimiento de respuesta temprana -1 (Egr-1),
NF-κB y factores inducidos por hipoxia (HIF). Todos
ellos participan en la activación de genes que
mantienen la homeostasis vascular12.
El factor de transcripción más estudiado es el
HIF-1, heterodímero formado por las subunidades
HIF-1α y HIF-1ß, cuya actividad biológica está determinada
por la expresión de la primera. Bajo condiciones
de normoxia, HIF-1 es hidroxilado por la
enzima prolil-hidroxilasa que promueve su unión al
complejo Von Hippel-Lindau ubiquitina ligasa
(VHL) permitiendo su ubiquitinación y posterior degradación
por el proteasoma.
Estudios in vitro muestran que en condiciones de
hipoxia, HIF-1 aumenta su estabilidad proteica y potencia
transcripcional ya que las enzimas responsables
de su metabolización, prolil-hidroxilasa y asparaginil-
hidroxilasa, se encuentran inactivas. Algunos
autores proponen a estas enzimas como los sensores
celulares de la hipoxia13 (fig. 4)
En estas circunstancias HIF-1 se acumula en el
núcleo y es responsable de la activación de los genes
de eritropoyetina, factor de crecimiento del endotelio
vascular (VEGF) y de enzimas glucolíticas y
transportadores de glucosa que controlan el ajuste
metabólico durante la generación de energía en el
ambiente hipóxico. Esta adaptación metabólica involucra
una mayor captación de glucosa a través del
incremento en la expresión de un transportador de
glucosa independiente de insulina (GLUT-1) y la inducción
de varias enzimas glucolíticas que mejoran
la utilización de sustratos12.
Alteraciones del endotelio ocasionadas
por el insulto hipóxico/isquémico
Función de barrera
Muchas de las funciones homeostáticas del endotelio
quiescente son mantenidas por señales intracelulares
mediadas por nucleótidos cíclicos. Uno de
ellos, 3', 5'-adenosin monofosfato cíclico (AMPc)
generado por activación de la enzima adenilato ci-
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Sensor O2
¿Enzimático?
Segundo mensajero
¿Proteínas cinasas?
Factor de transcripción
activación
Activación de genes
Proteínas efectoras
Citoplasma
Núcleo
Figura 4. Activación de la transcripción por estímulo hipóxico.
clasa secundario a la estimulación de receptores de
membrana acoplados a proteína G heterotrimérica,
participa en el mantenimiento de la arquitectura normal
del citoesqueleto de actina permitiendo al endotelio
mantener su característica de barrera permeable
selectiva (difusión restringida). En condiciones de
hipoxia la disminución del contenido intracelular de
AMPc ha sido implicada como mecanismo responsable
de cambios estructurales que llevan a la retracción
de la célula endotelial y aparición de pequeños
espacios intercelulares (1-3 μm). Esto conduce a un
fallo en la difusión restringida con la consiguiente
fuga paracelular de solutos, proteínas y leucocitos.
En el desarrollo de este síndrome de fuga capilar
también ha sido involucrado el VEGF que además
de promover la angiogénesis aumenta la permeabilidad
vascular12.
Fluidez circulatoria
La superficie endotelial es fenotípicamente no
trombogénica, situación que facilita el flujo sanguíneo.
La hipoxia/isquemia al igual que otros agentes
proinflamatorios puede desajustar el delicado balance
existente entre los mecanismos pro y anticoagulantes.
Estos cambios en las propiedades de la coagulación
durante la hipoxia surgen a través de
diversos mecanismos: a) exposición directa de colágeno
o factor tisular desde la membrana subendotelial
que activan la vía extrínseca de la cascada de la
coagulación; b) supresión de la expresión de trombomodulina,
proteína transmembrana restringida al
endotelio que acelera la acción de trombina en la activación
de la proteína C anticoagulante; c) exocitosis
de los cuerpos de Weibel-Palade, organelos cuyas
membranas están tapizadas con P-selectina en
cuyo interior poseen factor de von Willebrand, el
cual promueve la adhesión de plaquetas al endotelio;
d) caída brusca de los niveles de óxido nítrico
(NO) que contribuye a la acumulación de plaquetas
y trombosis; e) inducción de factor tisular por reclutamiento
de monocitos en la pared de los vasos; f)
supresión del eje fibrinolítico por monocitos, y g)
aumento de la expresión del PAI-112.
Regulación del crecimiento celular
La hipoxia/isquemia modula el potencial mitogénico
del endotelio al controlar la expresión de factores
que participan en la angiogénesis. HIF activados
inducen la expresión de VEGF, óxido nítrico
sintetasa endotelial (eNOS), factor de crecimiento
derivado de plaquetas (PDGF-B) y otros. No está
claro aún cuándo la neoangiogénesis comandada
por el endotelio activado en respuesta al insulto hipóxico/
isquémico tendrá un significado adaptativo
o maladaptativo13.
Modulación del tono vascular
El endotelio privado de oxígeno al inicio genera
una respuesta vasoconstrictora transitoria seguida de
vasorrelajación; sin embargo, si el estado de hipoxia
se prolonga, la respuesta vasoconstrictora se perpetúa.
La desendotelización experimental de los vasos
sanguíneos anula la vasoconstricción inducida por
hipoxia, motivo por el cual se cree que esta vasorreactividad
está mediada por factores derivados del
propio endotelio tales como anión superóxido, endoperóxido,
tromboxano A2 y endotelinas. Estas últimas
son expresadas en respuesta a la activación
transcripcional mediada por HIF-1 y AP-1.
La privación de oxígeno es capaz de activar la célula
endotelial en dos etapas, una inicial rápida independiente
de activación génica y síntesis de proteínas
que incluye retracción endotelial, liberación de
factor procoagulante de von Willebrand y expresión
de P-selectina y otra lenta que involucra la transcripción
de genes y síntesis proteica de moléculas de adhesión
y liberación de IL-1 e IL-8.
Por otro lado, el insulto hipóxico crónico estimula
la generación de factores mitogénicos con la consecuente
proliferación de células musculares lisas
vasculares y remodelamiento de la pared del vaso.
Si bien la respuesta vasoconstrictora podría considerarse
como disfuncional, también es cierto que ésta
resulta fisiológica al inicio de la reparación tisular13.
ENDOTELIO Y REGULACIÓN DEL TONO
VASOMOTOR
El endotelio se encuentra por una parte en contacto
directo con el torrente circulatorio y acoplado estructuralmente
con la célula muscular lisa de arterias
y arteriolas. Esta característica le permite controlar el
tono vasomotor por sí mismo (mecanismos endotelio
dependientes) y a través de la interacción que posee
con la célula muscular lisa vascular. Por otra parte,
existe evidencia de que las células de los propios parénquimas
son capaces, en condiciones de hipoxia,
de liberar adenosina, lactato, iones hidrógeno, iones
potasio y otras sustancias que pueden inducir vasodilatación
al activar canales de potasio ATP-dependientes
(KATP) que bloquean la entrada de calcio desde
el espacio extracelular vía canales dependientes
de voltaje (mecanismos endotelio independientes)6,11.
En primer lugar describiremos brevemente los
mecanismos que controlan la contracción de la célula
muscular lisa vascular para luego comentar cómo
participa el endotelio en la regulación del tono vasomotor
y su acoplamiento funcional en la unidad reguladora
mioendotelial.
Célula muscular lisa vascular
Las células musculares lisas vasculares mantienen
el tono del vaso sanguíneo de manera dependiente de
la concentración de calcio citosólico, calcio que proviene
tanto de los depósitos intracelulares, como de
aquel que ingresa a la célula a través de los canales
de membrana activados por voltaje. El calcio intracelular
disponible forma complejos con calmodulina y
activa una enzima quinasa que fosforila la cadena li-
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viana de miosina. Ésta, una vez fosforilada, adquiere
actividad ATPasa lo que permite el desplazamiento
de las cadenas de miosina sobre actina, evento medular
en la contracción de la fibra muscular lisa.
La célula muscular lisa vascular también posee
receptores de vasopresina cuyo bloqueo en modelos
animales con shock endotóxico reduce la presión arterial
y la tolerancia a la hipotensión. Si bien en condiciones
normales vasopresina posee un papel menor
en el control de la presión arterial, en los estados
de shock su concentración plasmática aumenta considerablemente
y contribuye a su regulación. Si la
hipotensión se mantiene por períodos más prolongados
(una hora) los niveles de vasopresina disminuyen
producto de una reducción de sus reservas en la
neurohipófisis mediada por estimulación barorrefleja
intensa y sostenida14.
Endotelio
Los mecanismos de regulación del tono vasomotor
dependientes del endotelio son complejos y dependen
del balance existente entre la síntesis de moléculas
vasoconstrictoras y vasodilatadoras. Entre
las moléculas vasoconstrictoras podemos mencionar
endotelinas, tromboxano A2 (TxA2) y factor activador
derivado de las plaquetas (PAF).
El vasoconstrictor más potente liberado por la célula
endotelial en los estados de hipoxia es la endotelina-
1 (ET-1). Una vez liberada se une a receptores
ubicados sobre las células del músculo liso vascular
donde incrementa el influjo de calcio, activa la proteína
quinasa C (PKC) y fosforila la miosina, secuencia
de eventos que conducen a vasoconstricción12.
Otras sustancias vasoconstrictoras inducidas por
hipoxia son PDGF-B y VEGF vinculadas también,
como se mencionó en párrafos anteriores, al proceso
de angiogénesis. Estas sustancias son expresadas
por la célula endotelial sólo en condiciones de hipoxia
y principalmente cuando ésta es de carácter prolongado
(más de 24 horas).
Las sustancias vasodilatadoras más importantes
liberadas por el endotelio incluyen: factor de relajación
derivado del endotelio o NO, prostaciclina
(PGI2) y factor de hiperpolarización dependiente del
endotelio (EDHF)6,12.
El óxido nítrico es una molécula inestable (vida
media inferior a 10 segundos) sintetizada por una familia
de óxido nítrico sintetasas a partir de L-arginina.
En la sepsis la producción de éste se encuentra
aumentada en relación con la mayor expresión de la
enzima óxido nítrico sintetasa inducible (i-NOS o
NOS II) mediada por citocinas inflamatorias. El NO
difunde desde el endotelio a las células musculares
lisas adyacentes y estimula directamente la enzima
guanilatociclasa soluble e induce vasodilatación al
reducir el contenido de guanosín monofosfato
(GMP) cíclico intracelular. Este último ejerce su
efecto vasodilatador al activar una enzima fosfatasa
de la cadena liviana de miosina15.
Por otra parte, el NO puede inducir vasodilatación
a través de la activación de canales de potasio
KATP y dependientes de calcio (KCa) presentes en la
membrana plasmática de células musculares lisas.
En ambas circunstancias, la movilización de potasio
al espacio extracelular implica hiperpolarización de
la membrana plasmática y la consiguiente vasodilatación.
La vasodilatación mediada por los canales KCa es
de vital interés ya que una de sus funciones es reducir
el efecto de los fármacos vasoconstrictores, situación
característica en todos los tipos de shock. El
NO puede activar estos canales por medio de nitrosilación
directa y por activación de la proteinaquinasa
dependiente de GMPc14.
La PGI2 ejerce su efecto vasodilatador al incrementar
el contenido de AMPc intracelular por activación
de la enzima adenilatociclasa a través de un
mecanismo dependiente de receptor que conduce a
una modificación de la arquitectura del citoesqueleto
de actina.
El EDHF ejercería su efecto por un mecanismo
independiente de segundos mensajeros al inducir hiperpolarización
de la membrana por apertura de canales
KATP con inhibición secundaria de la corriente
de calcio vía canales dependientes de voltaje. Se
sabe además que PGI2 y NO también modifican el
potencial de membrana celular con efecto similar al
EDHF (activación de canales KATP)6. Por otro lado,
estos canales KATP pueden ser activados también por
disminución de la concentración intracelular de
ATP, aumento de la concentración intracelular de
lactato e iones hidrógeno, sustancias neurohumorales
como péptido natriurético atrial, péptido relacionado
al gen de calcitonina y adenosina14.
Cabe destacar que los canales KATP se encuentran
presentes no sólo en las células musculares lisas
vasculares sino también en las células endoteliales
sugiriendo que éstas participan en la regulación del
tono vascular activadas por moléculas como PGI2 y
NO, que ejercen su efecto por medio de segundos
mensajeros intracelulares y también por acoplamiento
eléctrico de ambas membranas celulares6.
Unidad reguladora mioendotelial
Endotelio y músculo liso vascular se encuentran
estructuralmente relacionados por medio de uniones
amplias (gap junctions). Es posible entonces que
ambos tipos celulares se encuentren además funcionalmente
acoplados formando una especie de unidad
reguladora mioendotelial. Así, estas uniones
amplias permitirían el acoplamiento eléctrico de
ambas células, de modo tal que aquellos eventos
que modifican el potencial de membrana de la célula
endotelial serían captados por las células musculares
lisas que responderían modificando también el
suyo (hiperpolarización → vasodilatación). Como
estas gap junctions son más numerosas en arteriolas
de distribución, es posible que este acoplamiento
endotelio-músculo liso vascular adquiera mayor importancia
en lechos vasculares distales responsables
de la distribución del flujo sanguíneo a los distintos
parénquimas6.
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