Espectrofotometria

Trabajo Práctico N° 1: Cuantificación de sustancias mediante espectrofotometría.

Introducción:

En un análisis espectrofotométrico, es necesario conocer el “espectro de absorción” de la muestra que se quiere determinar. El espectro de absorción nos permite identificar la longitud de onda analítica, es decir, a qué longitud de onda la radiación incidente causará la absorción máxima de la especie a ser determinada y así obtener la mejor sensibilidad en su cuantificación. El espectro de absorción es la representación gráfica de la intensidad de absorción en función de la longitud de onda, y se determina midiendo la absorbancia a distintas longitudes de onda.

Todo método espectrofotométrico se basa en la comparación de la absorbancia de

una sustancia de concentración desconocida con la de una solución de la misma sustancia cuya concentración se conoce y a la cual se denomina solución patrón o estándar.

La absorbancia de una solución es la resultante de la absorbancia del soluto cuya

concentración se desea conocer y la de otros componentes del sistema (solventes, reactivos) que absorben también a esa longitud de onda.

Se obtiene la curva de calibrado midiendo la absorbancia de una serie de soluciones de concentraciones conocidas de una misma sustancia tratadas con un mismo método y medidas a igual longitud de onda en el mismo instrumento. Para medir la concentración de una sustancia se elige por lo general, la región de máxima absorción del espectro, denominada longitud de onda analítica.

El resultado se expresa en una gráfica de Absorbancia (A) en función de

concentración (c).

Objetivo general

-Adquirir destreza en el manejo del espectrofotómetro y materiales de laboratorio.

Objetivos específicos

- Conocer los fundamentos teóricos y prácticos de la espectrofotometría.

- Adquirir destreza en el manejo del espectrofotómetro y materiales de laboratorio, principalmente las micropipetas.

- Determinar la concentracion de soluciones de colorantes mediante espectrofotometría.

Materiales y Metodologia:

Materiales:

- Solución estándar de azul de metileno en agua de concentración conocida

- Solución estándar de rojo de metilo en etanol de concentración conocida

- Soluciones problemas de colorantes de concentraciones desconocidas

Técnica:

Espectrofotometría

Se realizaron varias diluciones de ambas soluciones estándar, a las cuales se les midió la absorbancia en el espectrofotómetro (ajustándolo a una absorbancia cero utilizando el blanco, solución que contiene todos los componentes del sistema menos el que se quiere cuantificar para poder eliminar la absorbancia de las interferencias) a una longitud de onda analítica, longitud a la cual la radiación incidente causa la absorción máxima de cada especie.

Se mide la absorbancia ya que, según la Ley de Lambert-Beer, esta es proporcional a la concentración, la longitud del paso de luz y al coeficiente de extinción molar: A= a.l.c

Con estos datos se construyeron 2 curvas de calibrado, una para cada solución estándar y se determinó la concentración de las muestras problema interpolando y mediante el cálculo del coeficiente de extinción molar (A= ε.c.l) con la ecuación de la recta de las curvas de calibrado.

Resultados

Concentración Volumen Colorante AM Volumen Agua

Blanco - ml 4 ml

5 μM 0,2 ml 3,8 ml

7,5 μM 0,3 ml 3,7 ml

20 μM 0,4 ml 3,6 ml

25 μM 1 ml 3 ml

50 μM 2 ml 2 ml

Concentración Volumen Colorante RM Volumen Etanol 95%

Blanco - ml 4 ml

5 μM 0,2 ml 3,8 ml

7,5 μM 0,3 ml 3,7 ml

20 μM 0,4 ml 3,6 ml

25 μM 1 ml 3 ml

50 μM 2 ml 2 ml

Volumen colorante/ solvente

Vi.Ci = Vf.Cf

4mL- 0,2mL= 3,8 mL

Vi.100μm = 4mL .5 μm

Vi=4mL .5 μm

100 μm

Vi= 0,2 mL

Vi.Ci = Vf.Cf

4mL- 0,3mL= 3,7 mL

Vi.100μm = 4mL .7,5 μm

Vi=4mL .7,5 μm

100 μm

Vi= 0,3 mL

Vi.Ci = Vf.Cf

...